去甲基化藥物地西他濱增強(qiáng)細(xì)胞毒藥物抗髓系白血病的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景及目的：急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)是一類(lèi)起源于造血干細(xì)胞遺傳及表觀(guān)遺傳學(xué)改變的骨髓細(xì)胞異常克隆增殖性疾病，造成骨髓細(xì)胞的增殖、分化及自我更新過(guò)程紊亂，原始細(xì)胞比例增高，破壞正常造血功能。表觀(guān)遺傳學(xué)影響染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，并調(diào)節(jié)基因表達(dá)和保證遺傳信息，這對(duì)健康細(xì)胞、組織和器官中的關(guān)鍵調(diào)控基因的正常表達(dá)十分重要。表觀(guān)遺傳發(fā)生變異將導(dǎo)致基因表達(dá)的變化，以DNA甲基化最為常見(jiàn)。目前AM L的標(biāo)準(zhǔn)治療

2、方案仍為蒽環(huán)類(lèi)藥物聯(lián)合阿糖胞苷(Cytarabine, Ara-C)。已發(fā)現(xiàn)在AML中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNAmethyltransferase1，DNMT1)表達(dá)上調(diào)，去甲基化藥物5-氮雜2’-脫氧胞苷，即地西他濱（Decitabine， DAC)是一種去甲基化劑，具有雙重作用機(jī)制：低濃度時(shí)使沉默失活的抑癌基因激活并促進(jìn)細(xì)胞分化，高濃度時(shí)通過(guò)抑制DNA合成發(fā)揮細(xì)胞毒作用。所以DAC在髓系細(xì)胞腫瘤中的作用受到廣泛關(guān)注，尤其是DAC聯(lián)合

3、其他化療方案（HA、HAG等)誘導(dǎo)治療復(fù)發(fā)、難治性及老年髓系白血病，在臨床上受到重視并獲得較理想的緩解率。本研究旨在比較去甲氧柔紅霉素(Idarubicin， ID A)或高三尖杉酯堿(Homoharringtonine, H H T)聯(lián)合Ara-C2種化療方案對(duì)初治AM L(除外急性早幼粒細(xì)胞，acute promyelocytic leukemia，A P L)的療效及不良反應(yīng)，并探討D A C增強(qiáng)細(xì)胞毒藥物HHT抗髓系白血病的機(jī)制

4、。
　　方法：(1)收集自2012年01年01日至2015年06年30日至本中心就診，并采用減低劑量的ID A或HHT聯(lián)合Ara-C治療的初治AML(APL除外）患者，分析療效其及不良反應(yīng)；（2)采用M TT比色法研究去甲基化藥物DAC、細(xì)胞毒藥物HHT單藥或兩藥序貫聯(lián)合處理后對(duì)髓系H L-60細(xì)胞株增殖的影響；（3)釆用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)藥物作用后胞漿P-環(huán)聯(lián)蛋白（P-catenin)的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞周期的變化影響；（4)采用West

5、ern b lo t檢測(cè)藥物處理H L-60細(xì)胞后p-catenin在細(xì)胞漿、細(xì)胞核中的表達(dá)水平；（5)采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測(cè)藥物作用后P-catenin在胞漿、胞核的定位變化;(6)采用qRT-PCR檢測(cè)藥物對(duì)HL-60細(xì)胞中W nt通路相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)誘導(dǎo)治療2療程后，低劑量IA方案組67例患者中46例達(dá)完全緩解( complete remission, C R), C R率為68.7％，低劑量

6、H A方案組20例患者中8例達(dá)CR，C R率為40%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（_P=0.02)。兩組患者總有效率（overall response rate, O R R)分別為77.6%和60%,兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。兩組方案的不良反應(yīng)主要包括血液學(xué)和非血液學(xué)兩方面，其中血液學(xué)方面主要為骨髓抑制，除中性粒細(xì)胞持續(xù)<1x109/L的中位時(shí)間差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義00.003)外，余均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05);而兩組非血液學(xué)不

7、良反應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05);(2) DAC、H H T抑制H L-60細(xì)胞的增殖；（3) D A C阻止p-catenin由胞漿進(jìn)入胞核，聯(lián)合HHT后，胞漿、胞核中的P-catenin表達(dá)量均明顯減少；（4) DAC、HHT使HL-60細(xì)胞阻滯于S期；（5)DAC下調(diào)Wnt通路相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)，聯(lián)合HHT后作用增強(qiáng)。
　　結(jié)論：（1)對(duì)于初治AM L(A P L除外）患者，低劑量IA方案優(yōu)于低劑量H A方案，差異具