中國明對蝦抗脂多糖因子(ALFFc)基因的重組表達.pdf

1、上世紀80年代開始，對蝦養(yǎng)殖業(yè)得到了迅速發(fā)展，這給沿海地區(qū)帶來了可觀的經(jīng)濟效益，但同時對蝦疾病也給養(yǎng)殖帶來了很大的困擾，造成了巨大的經(jīng)濟損失。近年來對蝦的免疫學研究得到了長足進展，不斷有免疫相關(guān)基因被克隆并得以深入研究?？怪嗵且蜃樱ˋnti-lipopolysaccharide factor，ALF）是發(fā)現(xiàn)于鱟和甲殼動物體內(nèi)的一種重要的抗菌蛋白，具有廣譜抗菌活性，對其進行深入研究將有利于對蝦疾病的控制。本文以中國明對蝦為材料，圍繞其A

2、LF（ALFFc）基因的重組表達展開研究，主要包括以下3個方面：
　　 1.根據(jù)中國明對蝦ALFFc基因設(shè)計引物，構(gòu)建了pET-DsbA-ALFFc原核表達載體，對其進行了原核表達。由于常規(guī)方法誘導ALFFc基因表達會出現(xiàn)宿主“自殺”現(xiàn)象，難以獲得重組蛋白，所以本研究嘗試了“低溫誘導法”，“DTT誘導法”，和“IPTG篩選法”
　　 三種策略，均實現(xiàn)了重組蛋白的高表達。
　　 2.對上述三種誘導方法進行比較，最終

3、選擇IPTG篩選法對DsbA-ALFFc重組蛋白進行大規(guī)模誘導表達，用His親和層析柱純化重組蛋白后免疫新西蘭大白兔，制備了抗血清。經(jīng)Western Blot檢測在預期位置上得到了一條特異性條帶。
　　 3.構(gòu)建了pPIC9K-ALFFc真核表達載體，用GS115宿主菌對ALFFc基因進行真核表達，并對發(fā)酵條件進行了摸索。用上述制備的抗血清做Western Blot檢測，結(jié)果顯示：在ALFFc預期位置出現(xiàn)了一條特異性條帶，這說明