脂多糖、多巴胺對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf

1、本文研究了脂多糖、多巴胺對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬作用和酚氧化酶原激活系統(tǒng)(proPO)的影響。主要探討了(1)凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)血細(xì)胞的體外免疫活性保存技術(shù);(2)脂多糖、多巴胺對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬作用機(jī)制的研究;(3)脂多糖、多巴胺對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞酚氧化酶原系統(tǒng)的影響;主要結(jié)果如下:
　　 1.凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞體外免疫活性保存技術(shù)的研究
　　 結(jié)果表明:4種保存液(CM、AC、MBH

2、SS、M199)對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞數(shù)量、存活率和酚氧化酶原級(jí)聯(lián)系統(tǒng)胞吐影響顯著(P＜0.05),隨著孵育時(shí)間的延長,4種保存液各處理組血細(xì)胞數(shù)量、存活率和絲氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力逐漸下降,而酚氧化酶活力逐漸升高。在60min內(nèi)CM處理組血細(xì)胞數(shù)量、存活率顯著高于MBHSS和M199處理組,而CM與AC處理組在40min內(nèi)無顯著性差異,60min時(shí)CM處理組血細(xì)胞存活率明顯高于.AC處理組,而血細(xì)胞數(shù)量無顯著差異;在0-20min內(nèi)

3、CM處理組絲氨酸蛋白酶原、酚氧化酶原活力均高于其它處理組,釋放的酚氧化酶活力則低于其它處理組,而在40-60min內(nèi)CM處理組與其它處理組各指標(biāo)差異顯著。同時(shí)在O-40min內(nèi)CM處理組各指標(biāo)無明顯變化,60min時(shí)差異顯著。由此可見,CM緩沖液可作為凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞體外免疫活性的保存液,而且體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)在40min內(nèi)完成。
　　 2.脂多糖、多巴胺對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬作用機(jī)制的研究
　　 結(jié)果表明:脂多糖LPS、多巴胺

4、DA對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞數(shù)量和吞噬率影響顯著(P＜0.05),LPS、DA與血細(xì)胞孵育30min后,高濃度(1-10mg/L或μmol/L)處理組對(duì)蝦血細(xì)胞數(shù)量均隨作用濃度增大而明顯下降,LPS處理組對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬率顯著升高,而DA處理組對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬率則表現(xiàn)出明顯的下降趨勢(shì)。同時(shí)在LPS作用下,分別加入PKC、TPK抑制劑chelerythrine、genistein后,凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞吞噬功能受到明顯的抑制作用,且抑制劑對(duì)吞噬的抑制效

5、果為genistein＞chelerythrine;在DA作用下,加入PKA抑制劑H-89后,血細(xì)胞吞噬作用得到增強(qiáng),而chelerythrine、genistein兩種抑制劑對(duì)吞噬無顯著影響。
　　 3.脂多糖、多巴胺對(duì)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞酚氧化酶原系統(tǒng)的影響
　　 結(jié)果表明:LPS、DA對(duì)凡納濱對(duì)蝦總血細(xì)胞數(shù)量(THC),三類血細(xì)胞數(shù)量(DHC)和酚氧化酶原proPO系統(tǒng)影響顯著(P＜0.05)。LPS、DA與血細(xì)胞孵育

6、30min后,高濃度(1-10mg/L或μmol/L)處理組總血細(xì)胞數(shù)量,小顆粒細(xì)胞數(shù)量(SGC)以及大顆粒細(xì)胞(LGC)均顯著下降,絲氨酸蛋白酶及血細(xì)胞酚氧化酶原活性明顯降低,而胞吐酚氧化酶活性則顯著升高。同時(shí),在LPS、DA作用下,加入PKC抑制劑chelerythrine后,凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞絲氨酸蛋白酶原及血細(xì)胞酚氧化酶原活力均顯著升高,胞吐酚氧化酶活力明顯受到抑制,加入。TPK抑制劑genistein后,胞吐酚氧化酶活力同樣下降

7、顯著,而對(duì)絲氨酸蛋白酶原活力無影響,而加入PKA抑制劑H-89則對(duì)酚氧化酶原系統(tǒng)無顯著影響。因此,凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞酚氧化酶的激活可能受到PKC和TPK信號(hào)通路共同調(diào)節(jié),而絲氨酸蛋白酶原的激活可能僅受PKC信號(hào)通路調(diào)節(jié)。另外,電泳結(jié)果顯示,LPS,DA誘導(dǎo)凡納濱對(duì)蝦血細(xì)胞釋放的酚氧化酶具有相同的分子量以及較高的雙酚活性。PAGE電泳下,血細(xì)胞胞吐的酚氧化酶蛋白分子量分別為526kDa和272kDa,而血細(xì)胞溶解產(chǎn)物僅得到一條蛋白條帶為27