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文檔簡介
1、研究背景和目的:0-12月的嬰兒期是出生后心臟發(fā)育的關(guān)鍵時期。這段時期內(nèi),嬰兒心臟的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生了快速的變化,外在表現(xiàn)為心率從150次/分鐘減慢為80次/分鐘,而收縮壓則從55mmHg上升到100mmHg。死于先天性心臟病的患兒55.3%是發(fā)生在這段時期并且絕大部分復(fù)雜先天性心臟病(如大動脈錯位、肺動脈閉鎖等)需要在新生兒或嬰兒早期手術(shù)。心肌細(xì)胞增殖關(guān)系到心臟的發(fā)育和手術(shù)后心臟的修復(fù),是目前研究的熱點(diǎn)之一。然而,由于人體心肌組織標(biāo)本的
2、獲取困難,目前對于人心肌細(xì)胞的增殖的研究僅有數(shù)篇報(bào)道,特別是對于嬰兒早期心肌細(xì)胞的增殖所知更少。本研究擬收集一歲內(nèi)的人心肌組織,觀察人嬰兒早期心肌細(xì)胞增殖的特征;并探討調(diào)控嬰兒心肌細(xì)胞增殖改變的內(nèi)在機(jī)理;在上述研究的基礎(chǔ)上,利用小分子化合物探索藥物促進(jìn)嬰兒早期心肌細(xì)胞增殖的可能;最后研究心肌細(xì)胞增殖在先天性心臟病外科手術(shù)中的意義。
方法:采用蘇木精-伊紅染色比較0-12月心肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征,利用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)觀
3、察Ki67陽性和Aurora B陽性心肌細(xì)胞的比例,明確嬰兒早期心肌細(xì)胞的增殖特征。利用Western Blot、Qrt-pcr、免疫熒光和免疫組化等方法觀察目前已知的關(guān)鍵性調(diào)控因子在人心肌細(xì)胞的表達(dá)情況;分離人心肌細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),觀察添加小分子化合物后,EdU陽性和Ki67陽性心肌細(xì)胞比例的改變;對小鼠行肺動脈環(huán)縮術(shù),超聲確定環(huán)縮效果,免疫熒光檢測右心室增殖的心肌細(xì)胞,Qrt-PCR檢測增殖肥大相關(guān)基因的改變。
結(jié)果:H
4、E染色顯示心肌細(xì)胞的平均體積隨年齡的增加而不斷加大。激光共聚焦顯微鏡顯示0-3月,4-6月和7-12月的Ki67陽性心肌細(xì)胞的比例分別為0.55±0.02%、0.05±0.01%和0.02±0.005%,而Aurora B陽性心肌細(xì)胞的比例分別為0.12±0.02%、0.01±0.01%和0.005±0.004%;流式細(xì)胞術(shù)顯示0-3月,4-6月和7-12月的Ki67陽性心肌細(xì)胞的比例分別為0.47±0.16、0.07±0.02和0.0
5、2±0.01。Western-blot,免疫熒光和免疫組化顯示關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子 NICD和 YAP1表達(dá)隨著年齡的推移而減少,而β-catenin的表達(dá)隨年齡的增加而增加。嬰兒早期心肌細(xì)胞在體外培養(yǎng)較易培養(yǎng),小分子化合物CHIR99021可以明顯促進(jìn)嬰兒早期心肌細(xì)胞的增殖。小鼠肺動脈環(huán)縮術(shù)后,增殖的心肌細(xì)胞明顯增加并且與增殖有關(guān)的基因也明顯上調(diào)。
結(jié)論:0-3月的人心肌細(xì)胞具有十分突出的增殖能力,是嬰兒早期心肌細(xì)胞的特征之一;N
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