硫化氫對大鼠心肌細(xì)胞肥大和心臟成纖維細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：研究硫化氫(Hydrogen Sulfide，H2S)對心肌細(xì)胞肥大和心臟成纖維細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制。
　　 方法：①以原代培養(yǎng)新生大鼠心室肌細(xì)胞(neonatal rat ventricularcardiomyocytes，NRVCMs)為研究對象，用鹽酸去氧腎上腺素(PhenylephrineHydrochloride，PE)和血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)刺激心肌細(xì)胞，建立體外心肌細(xì)胞肥大模型，觀

2、察不同濃度硫氫化鈉(Sodim Hydrogen Sulfide，NaHS，H2S的供體)處理細(xì)胞后對心肌細(xì)胞肥大的作用及機(jī)制。實(shí)驗(yàn)采用[3H]-亮氨酸摻入法測定心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成，蘇木素-伊紅染色(Hematoxylin-EosinStaining，HE)后用Image Measurement軟件測定心肌細(xì)胞表面積，實(shí)時定量PCR法檢測肥大心肌細(xì)胞胚胎型基因心房鈉尿肽(Atrial Natriuretic Peptide，ANP)和腦

3、鈉尿肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)的mRNA表達(dá)，Western Blot檢測細(xì)胞ERK1/2的磷酸化表達(dá)，熒光探針法和化學(xué)發(fā)光法檢測細(xì)胞活性氧類(Reactive Oxygen Species，ROS)的產(chǎn)生。②以原代培養(yǎng)新生大鼠心臟成纖維細(xì)胞(Neonatal Rat Cardiac Fibroblasts，NRCFs)為研究對象，用2％或10％胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS

4、)刺激NRCFs，建立NRCFs增殖模型，觀察不同濃度NaHS處理后對NRCFs的作用，用BrdU摻入法測定NRCFs增殖。
　　 結(jié)果：①本實(shí)驗(yàn)中所建立的肥大心肌細(xì)胞模型表現(xiàn)為[3H]-亮氨酸摻入顯著增加、心肌細(xì)胞表面積顯著增大及ANP和BNP mRNA表達(dá)顯著增加；一定濃度范圍的NaHS處理細(xì)胞顯著降低上述除ANP mRNA外的各項(xiàng)指標(biāo)。②100μM NaHS處理細(xì)胞顯著降低PE或AngⅡ引起的心肌細(xì)胞ROS的產(chǎn)生。④10μ