β3-AR對心肌細胞凋亡的影響及介導(dǎo)機制研究.pdf

1、目的：采用去甲腎上腺素（noradrenaline，NE）誘導(dǎo)心肌細胞凋亡，分別應(yīng)用β3-AR激動劑及阻滯劑進行干預(yù)，觀察β3-AR對心肌細胞凋亡的影響，探討β3-AR與PI3K/Akt和p38MAPK信號通路對心肌細胞凋亡的作用，為β3-AR的信號通路研究提出新的理論。
　　方法：使用優(yōu)化的Ⅱ型膠原酶和差速貼壁法分離培養(yǎng)心肌細胞，分別用總蛋白法、超速離心法、試劑盒法提取心肌細胞β3-AR膜蛋白。BCA法進行蛋白定量，Wester

2、n blot法檢測蛋白樣品中β3-AR提取蛋白的特異性。實驗分組：正常對照組；NE誘導(dǎo)組：NE培養(yǎng)48 h；BRL組：β3-AR激動劑（BRL37344）干預(yù)+NE培養(yǎng)48 h；SR組：β3-AR阻滯劑（SR59230A）干預(yù)+NE培養(yǎng)48 h。TUNEL法及流式細胞儀雙染法檢測心肌細胞凋亡率；Western blot檢測各組凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Bax和caspases-3蛋白的表達；Western blot和qRT-PCR檢測各組

3、PI3K/Akt和p38MAPK信號通路蛋白和mRNA的表達。
　　結(jié)果：1.優(yōu)化心肌細胞的培養(yǎng)方法可獲得產(chǎn)量大、濃度高的細胞，能滿足后續(xù)實驗；2.與其他組比較，試劑盒法提取蛋白的濃度最高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Western blot檢測結(jié)果示：與其他組比較，試劑盒提取法所得β3-AR膜蛋白含最高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；3.TUNEL法及流式細胞儀檢測心肌細胞凋亡率：BRL組細胞凋亡率明顯增高，與NE

4、誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；4.Western blot檢測結(jié)果示：BRL組caspases-3和Bax/Bcl-2比值增高，與NE誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；5.Western blot檢測結(jié)果示：BRL組磷酸化的p38MAPK蛋白表達增高，與NE誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；SR組磷酸化的Akt蛋白表達增高，與NE誘導(dǎo)組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：1.