雄激素通過間接調控PLZF介導的精原干細胞分化機制研究.pdf

1、雄激素是一種在精子發(fā)生過程中具有至關重要作用的類固醇激素，但是它在睪丸微環(huán)境中發(fā)揮作用的分子機制尚未完全揭示。此外，雄激素受體(androgen receptor，AR)是否在生殖細胞表達曾經也是一個有爭議的話題。目前許多觀點認為，睪丸生殖細胞里不表達雄激素受體，更確切的說，它在小鼠等嚙齒類、哺乳類動物的精子持續(xù)不斷的發(fā)生過程中不是必需的。然而，我們的實驗結果檢測到AR在出生后兩天的小鼠睪丸的前精原細胞有微弱的表達，但是在出生后第三天隨

2、著前精原細胞的遷移和定植，微弱的AR信號在生殖細胞中消失，并在支持細胞(Sertoli cells)中開始表達。進一步的實驗證明，從出生后5天開始小鼠的精原干細胞(spermatogonial stem cells，SSCs)中缺乏AR的表達，因此我們推測雄激素通過支持細胞中的雄激素受體間接調控精子發(fā)生，并以精原干細胞-支持細胞共培養(yǎng)系統和藥物阻斷雄激素的小鼠為模型來研究AR在精子發(fā)生中的調控機制。我們首先建立精原干細胞-支持細胞共培養(yǎng)

3、系統，然后通過添加雄激素和雄激素拮抗劑來調節(jié)系統中雄激素的水平，并利用蛋白質免疫印跡技術檢測相關信號蛋白的表達，然后對成年小鼠腹腔注射雄激素受體拮抗劑，再應用免疫組化、免疫熒光以及蛋白質免疫印跡技術檢測對精子發(fā)生的影響，結果顯示雄激素對精原細胞中早幼粒細胞白血病鋅指蛋白(promyelocytic leukemiazinc finger, PLZF)有負調控效應，隨后我們利用小于擾RNA(siRNA)技術敲低精原干細胞和支持細胞共培養(yǎng)系

4、統中Wt-1和β1-integrin的表達，發(fā)現轉錄因子Wt-1和跨膜蛋白β1-integrin作為潛在的中間信號分子參與睪丸微環(huán)境中支持細胞和精原干細胞的相互作用，調控精子發(fā)生。這些結果表明，雄激素以一種間接的方式通過多個步驟的信號轉導啟動精原干細胞的分化、促進精子發(fā)生。本實驗通過探討雄激素對精原干細胞維持基因Plzf的調控作用，進一步揭示了雄激素在精子發(fā)生過程中的生物學機制，明確了雄激素對精原干細胞增殖和分化活性的確切影響，從而為治