新型核苷類似物FNC抑制JeKo-1細(xì)胞增殖的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：
　　套細(xì)胞淋巴瘤（ mantle cell lymphoma,MCL)是B細(xì)胞型非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的一個(gè)獨(dú)特亞型[1]。目前在臨床上，MCL是一種非常危險(xiǎn)的疾病，它同時(shí)具有侵襲性淋巴瘤和惰性淋巴瘤不良的臨床特征，既具有侵襲性NHL的自然史和平均生存期，又有惰性淋巴瘤的耐受治療性。從遺傳學(xué)角度看，套細(xì)胞淋巴瘤的特點(diǎn)是單一t(11;14)（ q13;q32)染色體易位，這個(gè)易位主要涉及PRAD-1/bcl-1基

2、因，導(dǎo)致過(guò)表達(dá)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白cyclin D1[2]。套細(xì)胞淋巴瘤病人發(fā)病年齡多在60歲左右[3]，男性發(fā)病率是女性的2倍。目前任何常規(guī)治療都不能治愈套細(xì)胞淋巴瘤，因此迫切需要開(kāi)發(fā)新的更有效的抗腫瘤藥物。
　　FNC是一種新型胞嘧啶核苷類似物，前期的研究工作表明，F(xiàn)NC在體外對(duì)幾種非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞都有很好的增殖抑制作用，對(duì)肺癌、急性髓樣白血病等其他人癌細(xì)胞也有不同程度的作用[4]。在前期工作的基礎(chǔ)上，本課題選用人套細(xì)胞淋巴瘤J

3、eKo-1細(xì)胞為模型，研究FNC對(duì)套細(xì)胞淋巴瘤增殖的影響及其分子機(jī)制，為FNC早日應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1、 CCK8法檢測(cè)經(jīng)0.00032，0.0016，0.008，0.04，0.2μmol/L的FNC分別作用24、48、72 h后JeKo-1細(xì)胞增殖活性的改變，并用阿糖胞苷作為陽(yáng)性對(duì)照藥。
　　2、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)JeKo-1細(xì)胞經(jīng)0.0625，0.125，0.25，1μmol/L FNC作用

4、48h的凋亡率以及細(xì)胞周期分布。
　　3、利用SCID小鼠構(gòu)建人套細(xì)胞淋巴瘤JeKo-1體內(nèi)異種移植模型。待小鼠長(zhǎng)出腫瘤后，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為陰性對(duì)照組（0.9％NaCl注射液）、陽(yáng)性對(duì)照組（阿糖胞苷36mg/kg）、FNC低(1mg/kg)、中(2mg/kg)、高(3mg/kg)劑量組。均采用尾靜脈注射法給藥，連續(xù)給藥8天。用藥期間，觀察小鼠的一般狀況及腫瘤的生長(zhǎng)情況，并每?jī)商鞙y(cè)定一次小鼠體重。給藥結(jié)束后處死小鼠，

5、解剖并分離出腫瘤組織，稱瘤重，計(jì)算抑瘤率。
　　4、應(yīng)用人類全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)檢測(cè)給藥組和對(duì)照組瘤組織中基因表達(dá)的差異。
　　5、應(yīng)用RT-PCR技術(shù)驗(yàn)證基因表達(dá)譜芯片的檢測(cè)結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　1、 FNC可顯著抑制JeKo-1細(xì)胞的增殖，表現(xiàn)為明顯的時(shí)間和劑量依賴效應(yīng)。（P<0.05）；
　　2、 FNC可誘導(dǎo)JeKo-1細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期于G1/S期或G2/M期（P<0.05）
　　3

6、、成功構(gòu)建人套細(xì)胞淋巴瘤JeKo-1體內(nèi)異種移植模型。FNC低、中、高劑量組的抑瘤率分別為37.9%、75.8%、82.1%，呈劑量依賴性。
　　4、基因芯片結(jié)果顯示，與陰性對(duì)照組相比，高劑量組共有606個(gè)基因發(fā)生了明顯變化，其中上調(diào)基因448個(gè)，下調(diào)基因158個(gè)。這些基因主要與免疫系統(tǒng)過(guò)程、細(xì)胞過(guò)程和死亡等相關(guān)。
　　5、RT-PCR結(jié)果顯示腫瘤組織中E2F1、MKI67、CCND1和Raf1基因的表達(dá)降低，CDKN1A基