VEGFR-1為靶的siRNA抑制乳腺癌細(xì)胞增殖的體內(nèi)外研究.pdf

1、背景與目的：人類和動物血管生成與腫瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，腫瘤的血管形成(Angiogenesis)是一個相當(dāng)復(fù)雜的過程，受多種因子的正負(fù)調(diào)控，血管內(nèi)皮生長因子(VascularEndothelial Growth Factor，VEGF)（正性調(diào)控因子）能特異性與血管內(nèi)皮生長因子受體(Vascular Endothelial Growth Factor Recepter，VEGFR)結(jié)合[1-4]，促進(jìn)內(nèi)度細(xì)胞的分裂、增殖及遷移，

2、在腫瘤新生血管生成過程中起著至關(guān)重要的作用，抗血管生成療法已有效應(yīng)用于腫瘤治療。已發(fā)現(xiàn)的VEGFR有三種：VEGFRl(FLT-1)、VEGFR2（FLK-1、KDR）和FLT-4，VEGFR1在VEGF相關(guān)的病理性血管形成中發(fā)揮了重要作用[5]，其在乳腺癌細(xì)胞中陽性表達(dá)率達(dá)80％。理論上如果抑制VEGFR1的表達(dá)，即應(yīng)阻止腫瘤血管的生成從而抑制腫瘤生長/細(xì)胞增殖，成為腫瘤治療的一個途徑。因此，本課題采用化學(xué)修飾的siRNA在體內(nèi)外敲減

3、VEGFR1基因，探討化學(xué)修飾的小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)介導(dǎo)的RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)在乳腺癌基因治療的可行性及特異性。 方法：設(shè)計針對人和鼠VEGFR1基因的siRNA，選用陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000TM為轉(zhuǎn)染試劑，將siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、SH2-88和SK-BR-3裸鼠移植瘤，體內(nèi)外誘導(dǎo)RNAi。采用四甲基偶

4、氮唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞增殖，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)和蛋白印跡試驗(western blotting)分別檢測體內(nèi)外siRNA治療組與對照組VEGFR1基因表達(dá)變化。 結(jié)果：體外實驗結(jié)果顯示：靶向VEGFRl基因siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞后，兩種細(xì)胞增長均明顯減慢，細(xì)胞增殖均被抑制，人和鼠乳腺癌細(xì)胞生長抑制率達(dá)50.1％、4

5、9.8％； VEGFRlmRNA和蛋白的表達(dá)均明顯降低(p<0.05)，VEGFRl siRNA50 nmol/L、100 nmol/L和200 nmol/L，3組數(shù)據(jù)均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，50 nmol/L與100 nmol/L和200 nmol/L組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而100 nmol/L和200 nmol/L兩組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。VEGFRl siRNA抑制細(xì)胞增殖，并且在一定范圍內(nèi)抑

6、制率隨著濃度增加而增加，達(dá)到一定濃度后，再增加siRNA濃度并不提高沉默作用。裸鼠體內(nèi)實驗結(jié)果顯示：siRNA治療組裸鼠生長狀態(tài)良好，體重穩(wěn)定，瘤組織的增長受到明顯抑制；RT-PCR、蛋白印跡試驗的VEGFR1變化與體外試驗結(jié)果一致。體內(nèi)外對照組各指標(biāo)均無顯著變化。 結(jié)論：化學(xué)修飾的siRNA介導(dǎo)的RNAi在體內(nèi)外均能成功下調(diào)靶基因VEGFR1的表達(dá)，抑制乳腺癌細(xì)胞增殖，是潛在的腫瘤治療新方法，而VEGFR1亦可作為腫瘤治療的新