黃芪、水蛭有效組分對大鼠系膜細(xì)胞NF-κB、IκB、PDGF-BB、MMP-9的影響.pdf

1、在我國原發(fā)性腎小球疾病中，系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)是較為常見的病理類型，該病的主要發(fā)病機(jī)制是系膜細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)沉積，這兩種因素最終導(dǎo)致腎小球硬化發(fā)生，病情進(jìn)一步可發(fā)展為腎功能損害，終末期腎病是該病最嚴(yán)重的后果。目前常用的治療藥物多為免疫抑制劑、抗血小板制劑、糖皮質(zhì)激素以及對癥處理等，在臨床治療中取得一定效果，但其副作用顯著且易復(fù)發(fā)。近年來研究表明，健脾益腎、活血化瘀通絡(luò)等中藥在該疾病應(yīng)用中取得明顯療效，特別是以黃芪、水蛭

2、為代表的益氣化瘀藥物，已有大量文獻(xiàn)報道中藥能夠減少細(xì)胞增殖，調(diào)控細(xì)胞的凋亡，減少細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，改善腎臟纖維化程度，延緩疾病進(jìn)展成為腎小球硬化。
　　國內(nèi)外學(xué)者研究表明，系膜細(xì)胞增殖與核轉(zhuǎn)錄生長因子(NF-κB)的激活導(dǎo)致的炎癥介質(zhì)的釋放及細(xì)胞外基質(zhì)生成與降解的失衡息息相關(guān)，而NF-κB的激活與核轉(zhuǎn)錄生長因子抑制因子（IκB）的磷酸化及降解有密切關(guān)系;基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一個維持細(xì)胞基質(zhì)生成與降解平衡的系統(tǒng)，一旦平衡被打

3、破，則生成與降解失調(diào)，基質(zhì)沉積。本實驗擬從NF-κB、IκB、MMP-9、PDGF-BB等因子入手探討黃芪、水蛭有效成分抑制系膜細(xì)胞增殖的機(jī)理。
　　目的:探索黃芪、水蛭不同有效組分對經(jīng)過脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的大鼠MC的影響，以NF-κB、IκB、PDGF-BB、MMP-9等因子為切入點，探討黃芪、水蛭不同有效組分發(fā)揮作用的機(jī)制。
　　方法:LPS誘導(dǎo)大鼠系膜細(xì)胞(HBEH)增殖后，分別采用黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、水

4、蛭素進(jìn)行干預(yù)，24小時后收集細(xì)胞，采用CCK-8法觀察各單體及含藥血清對HBEH的增殖抑制率，Western blotting NF-κB、IκB蛋白的表達(dá)，Real time PCR法測定PDGF-BB、MMP-9 mRNA水平的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.Western blotting法顯示:模型組系膜細(xì)胞經(jīng)過LPS誘導(dǎo)增殖后NF-κB蛋白量比正常組增多，兩組相比(P＜0.05)，而黃芪多糖、黃芪甲苷、毛瑞異黃酮、水蛭素各實驗

5、組與模型組相比NF-κB的蛋白量均降低(P＜0.05)，表明給藥物均有作用。而各藥物組蛋白量相比P＞0.05，說明各組間差別不大。
　　2.Western blotting法顯示:模型組系膜細(xì)胞經(jīng)過LPS誘導(dǎo)增殖后，IκB蛋白表達(dá)量比正常組顯著降低，兩組相比(P＜0.05)，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮各實驗組IκB蛋白量比模型組高，相比(P＜0.05)，水蛭素組無明顯升高?？梢钥闯?，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮均可以不同程度

6、的抑制IκB的磷酸化，而水蛭素組無明顯升高。
　　3.Real time PCR法顯示:模型組系膜細(xì)胞經(jīng)過LPS誘導(dǎo)增殖后，MMP-9mRNA表達(dá)比正常組顯著增加，兩組相比(P＜0.01)，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、水蛭素各實驗組MMP-9mRNA的量比模型組均降低，相比(P＜0.01)，表明各藥物均有作用。而各藥物基因表達(dá)量相比P＞0.05，說明各組間差別不大。
　　4.Real time PCR法顯示:模型組系膜細(xì)

7、胞經(jīng)過LPS誘導(dǎo)增殖后，PDGF-BBmRNA表達(dá)比正常組顯著增加，兩組相比(P＜0.01)，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛瑞異黃酮、水蛭素各實驗組PDGF-BB mRNA的量比模型組均降低，相比(P＜0.01)，說明各藥物均有作用。而各藥物相比P＞0.05，說明各組間差別不大。
　　結(jié)論:黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮及水蛭素能夠降低LPS誘導(dǎo)HEBH增殖后NF-κB、MMP-9、PDGF-BB的表達(dá)，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮均可