Wnt-β-catenin信號(hào)通路在CB2激動(dòng)劑治療RA骨質(zhì)破壞中的作用及機(jī)制.pdf

1、背景和目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一類常見的自身免疫性疾病，其特點(diǎn)主要是慢性進(jìn)展性和侵蝕性關(guān)節(jié)炎，發(fā)病機(jī)制主要是炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)、滑膜病理性增生和骨質(zhì)破壞為主，發(fā)病率以及致殘率都比較的高。RA在臨床上的治療已經(jīng)得到了很大的提高，但是如今的這些治療方案和治療藥物對(duì)一部分RA病人依舊不敏感，所以研究新的治療靶點(diǎn)就顯得意義非常重大。近年來(lái)，II型大麻素受體(Cannabinoid receptor2，C

2、B2)在許多疾病領(lǐng)域成為研究熱點(diǎn)，包括過(guò)敏性接觸性皮炎，多發(fā)性硬化癥等，主要因?yàn)樗谕庵苊庖呦到y(tǒng)中表達(dá)并且具有顯著地抗炎效果。另外，由于 CB2激動(dòng)后不會(huì)產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)方面的副作用，使得它成為研究中關(guān)注的焦點(diǎn)。本課題的研究目的在于探究CB2能否成為治療RA的新靶點(diǎn)，分析CB2選擇性激動(dòng)劑HU-308通過(guò)Wnt通路對(duì)RA骨質(zhì)破壞治療作用的可能機(jī)制。
　　方法：DBA/1雄性小鼠40只，隨機(jī)分成4組，即正常對(duì)照組（Sham）、模型組

3、（Vehicle）、HU-308低劑量治療組（L-HU-308）、HU-308高劑量治療組（H-HU-308），每組10只。以膠原誘導(dǎo)的小鼠關(guān)節(jié)炎為動(dòng)物模型(Collagen-induced arthritis，CIA)，治療組于初次免疫后第28天經(jīng)腹腔注射分別給予 HU-308（1mg/kg/d）和 HU-308（10mg/kg/d），連續(xù)給藥6周。Sham組小鼠不予任何處理，常規(guī)飼養(yǎng)，Vehicle組小鼠通過(guò)腹腔注射生理鹽水0.1m

4、l/kg/d。觀察的指標(biāo)包括：小鼠關(guān)節(jié)的腫脹程度、關(guān)節(jié)組織被破壞的程度(HE染色，番紅 O染色，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色和Micro-CT)。免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)β-catenin、Dickkopf-1（Dkk1）、硬化蛋白（Sclerostin，Scl）以及核因子-κB受體活化因子配體（receptor activators of nuclear factor-kappa B ligand，RANKL）和骨保護(hù)素（osteo

5、protegerin，OPG）的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：通過(guò)炎癥半定量的評(píng)分結(jié)果發(fā)現(xiàn)，H-HU-308（10mg/kg/d）治療組可以有效的減輕CIA小鼠的關(guān)節(jié)紅腫程度，延遲關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展；HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)H-HU-308（10mg/kg/d）治療組能有效減少炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，以及減少關(guān)節(jié)滑膜組織病理性增生增厚；番紅O染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)H-HU-308治療組相較于Vehicle組，軟骨細(xì)胞顯著增多以及軟骨層結(jié)構(gòu)恢復(fù)顯著；TRAP染色結(jié)果發(fā)

6、現(xiàn)H-HU-308（10mg/kg/d）治療組破骨細(xì)胞數(shù)量顯著減少，而Vehicle組小鼠的關(guān)節(jié)周圍有大量破骨細(xì)胞；Micro-CT結(jié)果發(fā)現(xiàn)H-HU-308（10mg/kg/d）治療能顯著減輕CIA小鼠關(guān)節(jié)骨和軟骨的破壞程度，但在L-HU-308（1mg/kg/d）治療組中，治療效果不明顯。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示Vehicle組Dkk1、Scl的表達(dá)明顯增高，選擇性CB2受體激動(dòng)劑治療后表達(dá)顯著降低；而β-catenin的表達(dá)在治療組