Wnt-β-catenin信號(hào)通路在豬脂肪組織發(fā)育過程中的調(diào)控作用.pdf

1、脂肪組織不僅是被動(dòng)的能量?jī)?chǔ)存器官，也是能分泌多種生物活性因子的內(nèi)分泌器官。脂肪組織對(duì)生物體內(nèi)能量代謝起著重要的調(diào)控作用，脂肪組織發(fā)育異?？梢l(fā)肥胖、心血管疾病和II型糖尿病等相關(guān)疾病。脂肪組織的發(fā)育是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡過程，這一過程受到許多激素、基因和信號(hào)通路的調(diào)控。近來研究表明，Wnt/β-catenin信號(hào)通路在脂肪組織發(fā)育中起著重要的調(diào)節(jié)作用。因此，本試驗(yàn)以自然肥胖程度最高的動(dòng)物--豬為研究對(duì)象，利用石蠟切片HE染色，冰凍切片油紅O染色

2、，石蠟切片免疫組化，細(xì)胞培養(yǎng)，SQ RT-PCR，Western Blot等細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，在明確豬脂肪組織發(fā)育的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)規(guī)律的基礎(chǔ)上，研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)基因在豬脂肪組織發(fā)育過程中的表達(dá)規(guī)律，探討其在豬脂肪組織發(fā)育過程中的調(diào)控作用。主要研究結(jié)果如下： 1.1日齡時(shí)，脂肪組織中含有大量的前體脂肪細(xì)胞和基質(zhì)微管成分(SVF)，前體脂肪細(xì)胞體積小，核大而間質(zhì)少，只分化為多室脂肪細(xì)胞，多室脂肪細(xì)

3、胞開始聚集脂滴，隨著日齡的增長(zhǎng)，多室脂肪細(xì)胞迅速形成單室脂肪細(xì)胞，30日齡時(shí)兩種細(xì)胞幾乎各占1/2，此時(shí)單室脂肪細(xì)胞聚集脂滴的能力增強(qiáng)。到60日齡時(shí)，單室脂肪細(xì)胞為脂肪組織中的主要細(xì)胞。 2.隨著個(gè)體日齡的增長(zhǎng)，脂肪細(xì)胞主要轉(zhuǎn)錄因子PPARγ、C/EBPα及LPL mRNA的表達(dá)量逐漸升高，與此同時(shí)，脂肪組織中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)基因β-catenin、Fz1、GSK3βmRNA的表達(dá)量逐漸降低，60日齡以后，

4、維持在一個(gè)較低的水平，同時(shí)，在前體脂肪細(xì)胞和SVF細(xì)胞中，Wnt/β-catenin信號(hào)通路中第二信使β-catcnin蛋白的表達(dá)強(qiáng)度逐漸減弱，并且表達(dá)部位由核、質(zhì)均表達(dá)逐漸只在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，而成熟脂肪細(xì)胞中始終未檢測(cè)出β-catenin蛋白的表達(dá)。這表明Wnc/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)基因在豬脂肪組織發(fā)育的早期(1～60日齡)高表達(dá)，隨著脂肪組織的發(fā)育，其表達(dá)量逐漸降低(～120日齡)。 3.INF-α在脂肪細(xì)胞分化的前

5、48 h內(nèi)抑制脂肪細(xì)胞的分化，其作用呈劑量依賴型，最佳濃度為5 ng/mL。干擾Wnt/β-catenin信號(hào)通路中第二信使β-catenin基因使TNF-α抑制脂肪形成的作用受阻，從而證實(shí)其抑制作用是通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路來完成的。 4.用RT-PCR方法克隆出豬β-catcnin基因全長(zhǎng)CDS序列，GenBank的登陸號(hào)為EU431333。這為構(gòu)建豬β-catenin基因的表達(dá)載體，進(jìn)一步研究Wnt/β-