重組腺病毒HIF-1α基因?qū)Υ笫缶衷钚阅X缺血再灌注損傷后半胱氨酸蛋白酶3和熱休克蛋白90表達(dá)的影響.pdf

1、 中圖分類號(hào)：R743 單位代碼：10660 UDC：616.8 學(xué)號(hào)：10660S130261 學(xué)科專業(yè)代碼：1002100203 密級(jí)：公開(kāi) 貴 州 醫(yī) 科 大 學(xué) 2016 屆

2、碩 士 學(xué) 位 論 文 （專業(yè)學(xué)位） 重組腺病毒 重組腺病毒 HIF HIF-1α基因 α基因?qū)Υ笫缶衷钚阅X缺血再 對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注 灌注損傷后 損傷后半胱氨酸 半胱氨酸蛋白酶 蛋白酶 3 和熱休克蛋白 和熱休克蛋白 90 90 表達(dá)的 表達(dá)的影響 影響 The Effects of Recombinant Adenovirus HIF - 1α Gene on the expression of Caspase-3 and H

3、sp 90 after Cerebral Ischemia-reperfusion in Rats 論文作者：惠志蓉 指導(dǎo)教師：陶陶教授/主任醫(yī)師 申請(qǐng)學(xué)位：臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位 培養(yǎng)單位：臨床醫(yī)學(xué)院 學(xué)科專業(yè)：老年醫(yī)學(xué) 研究方向：腦血管病方向 研究起止日期：2013年9月至2016年6月 論文評(píng)閱人： 王傳森 教授/主任醫(yī)師 劉芳 教授/主任醫(yī)師 答辯委員會(huì)主席：楊蕊琳 教授/主任醫(yī)師 論文答辯日期：2016年5月18日

4、 二〇一六年五月 重組腺病毒 重組腺病毒 HIF HIF-1α基因 α基因?qū)Υ笫缶衷钚阅X缺血再灌注損傷后 對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后半胱氨酸 半胱氨酸蛋白酶 蛋白酶 3 和熱休克蛋白 和熱休克蛋白 90 90 表達(dá)的 表達(dá)的影響 影響 專業(yè)：老年醫(yī)學(xué) 碩士研究生：惠志蓉 導(dǎo)師：陶陶 教授 【摘要】 【摘要】 目的： 目的：通過(guò)觀察重組腺病毒缺氧誘導(dǎo)因子-1α（Recombinant adenovirus Con

5、taining Hypoxia-inducible Factor1α gene, AdHIF-1α）對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后半胱氨酸蛋白酶3和熱休克蛋白90基因表達(dá)的影響，以探討重組腺病毒缺氧誘導(dǎo)因子-1α的腦保護(hù)作用及可能的機(jī)制。 方法 方法: 1） 將健康雄性，6月齡，體重為200-250g的SD大鼠隨機(jī)分為以下五組：正常對(duì)照組（Normal） ，假手術(shù)組（Sham） ，局灶性腦缺血再灌注損傷組（CIR） ，重組腺病毒空載體組

6、（Ad） ，重組腺病毒HIF-1α干預(yù)組(AdHIF-1α)。根據(jù)再灌注時(shí)間，將各組分為4個(gè)亞組，即：6h，24h，48h，72h組。2）本實(shí)驗(yàn)用改良的Koizumi線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷2h模型， 通過(guò)腦部立體定位儀從大鼠側(cè)腦室分組進(jìn)行注射， 假手術(shù)組 （Sham） 和局灶性腦缺血再灌注損傷組 （CIR） 組注射生理鹽水，重組腺病空載體組（Ad）組注射重組腺病毒空載體（Ad） ，重組腺病毒AdHIF-1α干預(yù)組(AdHI

7、F-1α)注射重組腺病毒HIF-1α（AdHIF-1α） 。3）大鼠腦缺血模型建立成功后， 行腦組織冰凍切片證實(shí)基因注射進(jìn)入側(cè)腦室內(nèi)， 按各亞組時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行腦缺血神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分，行TTC染色測(cè)腦梗死體積，測(cè)腦組織含水量，HE染色觀察腦組織的病理學(xué)形態(tài)改變： 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)及實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)大鼠腦中半胱氨酸蛋白酶3mRNA和熱休克蛋白90mRNA表達(dá)水平。結(jié)果： 結(jié)果：1）與CIR組、Ad組比較，AdHIF-

8、1α在6h、24h、48h組大鼠神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但72h組大鼠神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P<0.05） 。2）TTC染色后，AdHIF-1α干預(yù)組分別與CIR組、Ad組比較，大鼠腦梗死體積百分比明顯縮小，且均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P<0.01） 。 3） 隨著再灌注時(shí)間延長(zhǎng)， 各模型組大鼠腦水含量逐漸增加， 在24h-48h時(shí)間段腦水含量增長(zhǎng)速度最快。AdHIF-1α干預(yù)組于24h，48h