重組腺病毒HIF-1α對(duì)大鼠局灶性腦缺血灌注損傷后AKT與BAD表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：探討重組腺病毒HIF-1α（Recombinant adenovirus Containing Hypoxia-inducible Factor1αgene，AdHIF-1α）干預(yù)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的作用，以及 AdHIF-1α對(duì)AKT、p-AKT及BAD的表達(dá)影響，為闡明AdHIF-1α的抗細(xì)胞凋亡機(jī)制提供依據(jù)。
　　方法：將 SD雄性大鼠隨機(jī)分為：正常對(duì)照組（Normal），假手術(shù)組(Sham)，局灶性腦缺血再灌

2、注組（CIR）,重組腺病毒空載體組（Ad），重組腺病毒HIF-1α干預(yù)組（AdHIF-1α）。根據(jù)再灌注時(shí)間，將各組分為4個(gè)亞組，即：6h、24h、48h、72h組；采用線栓法制備局灶性腦缺血再灌注損傷模型。腦部立體定位儀定位側(cè)腦室注射，Normal組及Sham組注射生理鹽水，Ad組注射Ad，AdHIF-1α干預(yù)組注射 AdHIF-1α。模型成功后，按各亞組時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分，取新鮮腦組織測(cè)量梗死側(cè)腦組織腦水含量；行組織冰凍

3、切片證實(shí)基因注射進(jìn)入側(cè)腦室內(nèi)；HE染色觀察腦組織的病理學(xué)形態(tài)改變；免疫組化法及Western Bolt法檢測(cè)AKT，p-AKT，BAD的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.AdHIF-1α干預(yù)組大鼠局灶性神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分與 CIR組、Ad組比較，72h組大鼠神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分降低（P＜0.05）。2.TTC染色AdHIF-1α干預(yù)組大鼠腦梗死體積百分比分別與CIR組、Ad組比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。3.模型組大鼠腦水含量隨再

4、灌注時(shí)間延長(zhǎng)，其腦水含量逐漸增加，于24h至48h增長(zhǎng)速度最快。AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量分別與 CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，除6h外，其余各時(shí)間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。4.HE染色見AdHIF-1α干預(yù)組在腦缺血再灌注72h后神經(jīng)元病理學(xué)改變明顯減輕。5.免疫組化法檢測(cè)AKT、p-AKT、BAD蛋白的表達(dá)：各模型組AKT、p-AKT、BAD蛋白表達(dá)總體趨勢(shì)相同，即 Sham組各蛋白為弱表達(dá)，各模型組蛋白表達(dá)2

5、4h達(dá)高峰，48h開始下降。（1）AKT、p-AKT：AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)AKT、p-AKT蛋白表達(dá)分別與CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，除6h外，其余各時(shí)間點(diǎn)AKT蛋白表達(dá)均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。（2）BAD：AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)BAD表達(dá)分別與CIR組及Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，24h、48h BAD表達(dá)具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），6h、72h Bad表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。6.Weste

6、rn Bolt法檢測(cè)AKT、p-AKT、BAD蛋白的表達(dá)：該法檢測(cè)各組AKT、p-AKT、BAD蛋白表達(dá)高峰時(shí)間同免疫組化法。（1）AKT、p-AKT：AdHIF-1α干預(yù)組AKT、p-AKT蛋白表達(dá)增加，各時(shí)間點(diǎn)AKT、p-AKT蛋白表達(dá)與CIR組及Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（2）BAD：AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)BAD蛋白表達(dá)減少，各時(shí)間點(diǎn)BAD蛋白的表達(dá)分別與CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，除72h