重組腺病毒HIF-1α對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后AKTmRNA與BADmRNA表達(dá)的影響的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察重組腺病毒 HIF-1α（Recombinant adenovirus Containing Hypoxia-inducible Factor1αgene，AdHIF-1α）對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷后AKTmRNA、BADmRNA的表達(dá)及其它相關(guān)指標(biāo)的影響，以探討重組腺病毒HIF-1α的腦保護(hù)治療作用以及其中可能的機(jī)制。
　　方法：將SD雄性大鼠隨機(jī)分為：正常對(duì)照組（Normal），假手術(shù)組（Sham），局灶性腦

2、缺血再灌注組（CIR），重組腺病毒空載體組（Ad），重組腺病毒HIF-1α干預(yù)組(AdHIF-1α)。根據(jù)再灌注時(shí)間，將各組分為4個(gè)亞組，即：6h，24h，48h，72h組；采用線栓法制備局灶性腦缺血再灌注損傷模型。通過(guò)腦部立體定位儀從側(cè)腦室進(jìn)行注射，CIR組注射生理鹽水，Ad組注射重組腺病毒空載體（Ad），AdHIF-1α干預(yù)組注射重組腺病毒HIF-1α（AdHIF-1α）。模型成功后，按各亞組時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分，取新鮮腦

3、組織測(cè)量梗死側(cè)腦組織含水量；行TTC染色測(cè)腦梗塞體積；行腦組織冰凍切片證實(shí)基因注射進(jìn)入側(cè)腦室內(nèi)；HE染色觀察腦組織的病理學(xué)形態(tài)改變；RT-PCR法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法及原位雜交法檢測(cè)AKT、BADmRNA基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：⑴與CIR組、Ad組比較，AdHIF-1α干預(yù)組大鼠局灶性神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分在各時(shí)間點(diǎn)上，6h、24h、48h組大鼠神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但72h組大鼠神經(jīng)功能缺失體征評(píng)分降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

4、（P<0.05）。⑵分別與CIR組、Ad組比較，AdHIF-1α干預(yù)組大鼠腦梗死體積百分比明顯縮小，且均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。⑶隨再灌注時(shí)間延長(zhǎng)，模型組大鼠腦水含量逐漸增加，在24h-48h時(shí)間段腦水含量增長(zhǎng)速度最快。AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量分別與CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較腦水含量有所下降，除6h外，其余各時(shí)間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。⑷HE染色見(jiàn)AdHIF-1α干預(yù)組在腦缺血再灌注72h后神經(jīng)元病

5、理學(xué)改變明顯減輕。⑸原位雜交法檢測(cè)AKTmRNA、BADmRNA的表達(dá)：各模型組AKTmRNA和BADmRNA表達(dá)總體趨勢(shì)相同，即 Sham組二者為弱表達(dá)，CIR、Ad及 AdHIF-1α組二者的表達(dá)均在24h達(dá)高峰，48h開(kāi)始下降。AKTmRNA：AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)分別與CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，AKTmRNA的陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；BADmRNA：AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)分別與

6、CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，BADmRNA的陽(yáng)性表達(dá)明顯減弱，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。⑹RT-PCR法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)AKTmRNA、BADmRNA的表達(dá)：各模型組AKTmRNA和BADmRNA表達(dá)總體趨勢(shì)相同，即Sham組二者均為弱表達(dá)，CIR、Ad及AdHIF-1α組二者的表達(dá)均在24h達(dá)高峰，48h開(kāi)始下降。AKTmRNA：AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)分別與CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，AKTmRNA

7、的陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；BADmRNA：AdHIF-1α干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)分別與CIR組、Ad組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，BADmRNA的陽(yáng)性表達(dá)明顯減弱，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：①HIF-1α對(duì)鼠腦局灶性缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。②HIF-1α可能是通過(guò)上調(diào)其下游靶基因的表達(dá)，繼而促進(jìn)抗細(xì)胞凋亡基因AKT的表達(dá)增加、促凋亡基因BAD的表達(dá)減少，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)鼠腦局灶性缺血再灌注損傷后缺血半