葛根素對大鼠心肌缺血再灌注后熱休克蛋白70表達的影響.pdf

1、長時間缺血可造成心肌組織損傷，早期再灌注可挽救缺血的心肌組織。但再灌注本身可引起細胞損傷進一步加重，即再灌注損傷。因此采取有效措措施防治心肌缺血再灌注損傷，這對心肌細胞存活具有重要意義。近年來實施心肌保護方面的研究多注重于調(diào)動心臟內(nèi)源性的保護機制，其中熱休克蛋白70(HSP70)作為一種重要的伴侶蛋白，在抗心肌缺血性損傷中發(fā)揮著重要作用。 在臨床上，對于缺血性心血管疾病通過藥物進行缺血前HSP70的誘導(dǎo)表達進而發(fā)揮心肌保

2、護作用已成為新的研究熱點。葛根素作為葛根的主要藥理成分，在臨床上已證明具有抗氧化基、擴張冠脈和腦血管、減慢心率、改善微循環(huán)等多種藥理活性作用。現(xiàn)有實驗表明葛根素可以促進腦缺血后HSP70表達增強，減少梗死灶面積，而有關(guān)葛根素誘導(dǎo)缺血再灌注后心肌HSP70表達的研究目前尚未見報道。 目的：我們的研究：(1)觀察大鼠心肌缺血再灌注后HSP70表達量的變化：(2)葛根素對大鼠心肌缺血再灌注后HSP70表達的影響；(3)葛根素對大鼠心肌

3、缺血再灌注后炎性損傷的保護作用，以尋求新的心肌保護方法。 方法：1．實驗分組：將48只健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(250±30g)隨機分為對照組及葛根素組，每組根據(jù)再灌注時間不同分為缺血20min再灌注0.5、4及8h小組，其中每小組各8只大鼠。葛根素組在結(jié)扎左冠狀動脈前降支前10分鐘經(jīng)腹腔給予葛根素注射液，劑量為50mg／kg，對照組則給予等容量的0.9％氯化鈉注射液。2．缺血再灌注模型的建立：結(jié)扎SD大

4、鼠左冠狀動脈前降支以建立心肌缺血／再灌注模型。以標準II導(dǎo)聯(lián)S-T段抬高≥0.1mV作為缺血成功的標志，以抬高的S-T段下降1／2以上作為再灌注成功的標志。3.觀察指標：①SP免疫組織化學法檢測心肌HSP70的含量，每組大鼠取同部位切片，每張切片任選5個視野(x200)測定HSP70陽性數(shù)。以心肌細胞胞漿／核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。②髓過氧物化酶(Myeloperoxidase MPO)的測定：在再灌注的不同時點，經(jīng)頸總主動脈抽血2

5、ml，離心，取上清，檢測血清中MPO的含量。4.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計：實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(±S)表示，以P<0.05認為有統(tǒng)計學差異，P<0.01認為有顯著性差異。 結(jié)果：1.在光學顯微鏡下，可觀察到：HSP70主要在心肌細胞的胞漿表達，以細胞核的核周最為明顯，細胞核很少表達，HSP70隨著再灌注時間延長表達增強(F=53.88，P<0.001)。與對照組相比，在再灌注后0.5h時間點葛根素組HSP70免疫陽性細胞計數(shù)6.38±

6、2.57vs 4.24±1.83， P<0.05；再灌注后4h時間點葛根素組HSP70免疫陽性細胞計數(shù)18.13±4.22 vs 12.12±3.87，P<0.01；再灌注后8h時間點葛根素組HSP70免疫陽性細胞計數(shù)36.25±8.61 vs28.12±4.05.P<0.05。 2.隨著灌注時間的延長，MPO的活性呈現(xiàn)下降的趨勢(F=9.58，P<0.01)。與對照組相比，在再灌注后0.5時間點葛根素組MPO含量81.54±

7、13.13 vs103.41±10.95 P<0.01；在再灌注后4h時間點葛根素組MPO含量65.28±7.38 vs77.56±8.38 P<0.01；在再灌注后8h時間點葛根素組MPO含量62.50±6.07 vs72.62±6.69 P<0.01。在再灌注后各時間點，葛根素組HSP70含量與MPO含量呈負相關(guān)。(r=-0.50)。 結(jié)論：1、葛根素可促進缺血再灌注損傷后心肌HSP70的表達。 2、葛根素可顯著