葛根素對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察大鼠腦缺血再灌注后血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(ⅦGF)、血管生成素1(Ang-1)、血管生成素2(Ang-2)表達(dá)的時(shí)間規(guī)律。觀察葛根素不同給藥時(shí)間點(diǎn)、不同給藥劑量對(duì)模型大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、腦微血管密度(MVD)、腦水腫及腦梗死體積變化的影響，以及對(duì)ⅦGF、Ang一1、Ang一2表達(dá)的干預(yù)作用。研究葛根素治療腦梗死的保護(hù)作用及其機(jī)制，并為臨床應(yīng)用的最佳時(shí)間選擇提供參考。 方法： 1．通過線栓法，即結(jié)扎并切斷大鼠右側(cè)頸外動(dòng)

2、脈，游離其主干殘端，在殘端處剪一小口，將栓線沿頸內(nèi)動(dòng)脈緩慢推進(jìn)至大腦中動(dòng)脈起始部，建立大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞(MCA0)模型。 2．選擇葛根素27mg·kg-1、54mg-kg-1、108mg-kg-1作為低、中、高劑量組分別在上述3個(gè)時(shí)間點(diǎn)給予模型鼠腹腔注射，溶媒對(duì)照組給等容積50％的丙二醇，模型對(duì)照組不給藥。每天給藥一次，連續(xù)給藥7天，于末次給藥后2小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分。 結(jié)果： L大鼠腦缺血再灌注后ⅦGF、A

3、ng-l、Ang-2表達(dá)的時(shí)間變化規(guī)律 ⅦGF蛋白表達(dá)規(guī)律： Ang-1蛋白表達(dá)規(guī)律： Ang-2蛋白表達(dá)規(guī)律： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合分析，Oh、24h、48h分別是ⅦGF與Ang2表達(dá)的低點(diǎn)、高峰、回落的時(shí)間點(diǎn)，將此定為下一步實(shí)驗(yàn)的給藥時(shí)間點(diǎn)。 2．葛根素對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 對(duì)神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的影響：葛根素27mg·Kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)

4、分分別為1．50±O．32、1．41±O．20、1．33±041；葛根素54mg·kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分分別為1．42±O．20、1．33±O．25、1．25±O．27；葛根素108mg．Kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分分別為1．25±O．42、1．17±O．26、1．08±O．20。與模型對(duì)照組1．83±O．26、1．75±0．27、1．67±O．26相比，

5、除小劑量組第Oh和第48h外，其余各藥物劑量組均顯著性升高(P＜O．05)；溶媒對(duì)照組無顯著差異，其評(píng)分分別為1．75±O．27、1．83±O．26、1．75±0．27(P＞O．05)。 對(duì)腦含水量的影響：與模型對(duì)照組腦含水量百分率80．61土O．99相比，葛根素27mg·kg-1、54mg·Kg-1、108mg·kg-1組腦含水量分別為78．90±O．15，7857土O．40、77．94士050，顯著性降低(P＜O．01)；與

6、模型對(duì)照組相比，溶媒對(duì)照組為80．06士O．89，無顯著性差異(P＞O．05)。 對(duì)腦梗塞體積的影響：與模型對(duì)照組腦梗死體積176．16±6．94mm3相比，葛根素27mg·kg-1、54mg·kg-1、108mg·Kg-1組分別為124．87士1O．18mm3、102．67土¨．73mm3、94．60士12．92mm。，顯著性縮小(P＜O．01)；溶媒對(duì)照組為174．13士731mm3，與模型組比較，無顯著差異(P＞O．05)

7、。 對(duì)腦微血管密度(MVD)的影響：葛根素27mg．Kg-1組在0h、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的腦MVD分別為40．33±2.58、40．67±2．16、40．67±2．73；葛根素54mg．Kg-1組在0h、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的MVD分別為49．67±2．94、50．33±2．58、4933±2．73；葛根素108mg·kg-1組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的MVD分別為53．50±2．88、52．33±

8、2．94、52．33±3．72。與同一時(shí)間點(diǎn)模型對(duì)照組MVD值32．67±2．88、32．83±2．71、33．17±3．77相比，各藥物劑量組均顯著增加(P＜O．05)。溶媒對(duì)照組MVD值32．83±2．14、32．67±3．08、32．67±3．50，與模型組相比，無顯著差異(P＞O.05)。 3．葛根素對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷時(shí)促血管生成作用機(jī)制研究對(duì)VEGＦ蛋白表達(dá)的影響：葛根素27mg·Kg-1組在Oh、24h、48h三

9、個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的10D分別為3．85±O．12、3．54±O．13、3．48±O．19；葛根素54mg．Kg-1組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的10D分別為4．12±O．24、3．86±O．12、3．77±O．18；葛根素108mg·Kg-1組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的IOD分別為4．45±O．16、4．15±O.16、4．10±O．12。與模型對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)IOD值3．02±O．07、3．04±O．14、3．07±O

10、．17比較，各藥物劑量組均顯著升高(P＜O．01)；溶媒對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)IOD值為3．08±O．13、3．08±O．16、3．03±O．13，與模型組相比，無顯著差異(P＞O．05)。 對(duì)VEGFmRNARA表達(dá)的影響：葛根素27mg·Kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的IOD分別為3．90±O．14、3．90±O．18、3．85±O．14；葛根素54mg·Kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的10D

11、分別為4．16±O．19、4．09±0．14、3．93±O．22；葛根素108mg·kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的IOD分別為4．75±0．17、4．69±O．16、4．64±O．16。與模型對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)10D值3．07±O．10、3．08±0．13、3．09±O．13比較，各藥物劑量組均顯著升高(P＜O．01)。溶媒對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)IOD值為3．13±O．10、3．13±O．16、3．09±O．14，與模型組相比

12、，無顯著差異(P＞O．05)。 對(duì)Ang-1蛋白表達(dá)的影響：葛根素27mg．kg一1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的IOD分別為3．73±O．16、3．52±O．08、3．50±O．16；葛根素54mg·Kg-1劑量組在0h、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的10D分別為3．90±O．08、3．75±O．¨、3．72±0．15；葛根素108mg·kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的IOD分別為4．08±O

13、．18、3．87±O．12、3．84±O．15。與模型對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)10D值2．99±O．10、3．01±O．12、3．04±O．13比較，各藥物劑量組均顯著升高(P＜O．01)。溶媒對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)IOD值為3．01±O．12、3．02±O．07、2．98±O．15與模型組相比，無顯著差異(P＞O．05)。 對(duì)Ang-2蛋白表達(dá)的影響：葛根素27mg．kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的10D分別為4．00±O．

14、14、4．00±0．15、3．99±O．10；葛根素54mg·kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的IOD分別為4．06±O．21、4．01±O．16、4．01±O．13；葛根素108mg·kg-1劑量組在Oh、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)給藥的10D分別為4．24±O．14、4．13±O．2、4．12±O．17。與模型對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)10D值3．79±0．18、3．79±O．n、3．80±O．13比較，各藥物劑量組均顯著升高(

15、P＜O．05)。溶媒對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)10D值為3．79±O．12、3．80±0．12、3．78±O．18，與模型組相比，無顯著差異(P＞O．05)。 結(jié)論： 1．本研究證實(shí)，在局灶性腦缺血2小時(shí)再灌注Oh開始，VEGF表達(dá)的顯著增強(qiáng)、Ang．1表達(dá)急劇下降以及Ang-2表達(dá)明顯上調(diào)。24hⅦGF和Ang-2達(dá)到峰值，Ang-1達(dá)到最低點(diǎn)；48hVEGF和Ang-2開始回落，血g一1開始上升，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。其早期的變化有利