美達(dá)霉素產(chǎn)生菌菌種鑒定及調(diào)控基因med-ORF10的功能研究.pdf

1、菌株AM-7161(AM-7161)能夠產(chǎn)生具有強(qiáng)抗腫瘤活性的抗生素美達(dá)霉素(medermycin)，作為一株重要的抗生素產(chǎn)生菌，迄今為止并未進(jìn)行系統(tǒng)的分類鑒定，文獻(xiàn)中僅根據(jù)形態(tài)認(rèn)為是鏈霉菌(Streptomyces sp.AM-7161)；med-ORF10是美達(dá)霉素生物合成途徑中的一個(gè)重要基因，通過(guò)前期工作初步認(rèn)為是一新型轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因。本研究首先對(duì)鏈霉菌AM-7161進(jìn)行分類鑒定，并利用生物信息學(xué)分析、基因互補(bǔ)和基因突變手段對(duì)med

2、-ORF10展開功能研究，內(nèi)容如下：
　　 在不同條件下培養(yǎng)AM-7161并觀察其培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)情況及產(chǎn)素情況，以及進(jìn)行掃描電鏡觀察、革蘭氏染色等，表明：AM-7161為典型鏈霉菌形態(tài)，但較一般鏈霉菌生長(zhǎng)迅速；克隆其16S rRNA進(jìn)行同源性分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明：AM-7161與納士維爾鏈霉菌xsd08147(Streptomyces nashvillensis strain xsd08147)序列同源性高達(dá)99％，確定其為

3、納士維爾鏈霉菌的一個(gè)亞種；
　　 對(duì)Med-ORF10的一級(jí)、二級(jí)及三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，結(jié)果顯示：Med-ORF10為一個(gè)非常小的疏水蛋白分子，具有一個(gè)SH3(Src homolog3)基序和一個(gè)酪蛋白激酶2(CK2)基序；僅含一個(gè)NTF2(Nuclear transportor factor2，核運(yùn)輸因子2)結(jié)構(gòu)域；其同源基因在芳香聚酮抗生素基因簇中廣泛存在，推測(cè)是抗生素合成必須基因；與放線紫紅素生物合成基因簇中的ac

4、tⅥ-ORFA(編碼新型正調(diào)控蛋白)同源性最近，推測(cè)二者功能一致：
　　 對(duì)med-ORF10的功能進(jìn)行體內(nèi)遺傳學(xué)分析：表明med-ORF10突變導(dǎo)致美達(dá)霉素的積累量和孢子產(chǎn)量下降：互補(bǔ)后發(fā)現(xiàn)美達(dá)霉素的積累和孢子產(chǎn)量均有一定程度的恢復(fù)，推測(cè)med-ORF10是美達(dá)霉素合成中的調(diào)控基因，同時(shí)有可能會(huì)影響到菌株的分化；
　　 以上研究結(jié)果初步確定了美達(dá)霉素產(chǎn)生菌鏈霉菌AM-7161的分類地位，并且為美達(dá)霉素生物合成調(diào)控基因的