酵母FUR4擬南芥轉(zhuǎn)基因植株及At5g03555的初步研究.pdf

1、FUR4 蛋白是釀酒酵母（S. Cerevisiae）中的尿嘧啶透性酶（uracil permease），介導尿嘧啶的吸收而不介導其他內(nèi)源的嘧啶如胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿素的吸收。FUR4 蛋白定位在質(zhì)膜的脂質(zhì)微區(qū)中，利用質(zhì)子共偶聯(lián)轉(zhuǎn)運尿嘧啶，F(xiàn)UR4 蛋白也能把5-氟尿嘧啶（5-FU）轉(zhuǎn)運到細胞中。Fur4 突變的酵母不能運輸尿嘧啶且對5-FU 不敏感，而且FUR4蛋白過表達會對細胞造成一定的毒性。
　　 為進一步闡明FUR4的功

2、能，本論文主要對FUR4 蛋白在擬南芥中的作用及其擬南芥的同源蛋白At5g03555 進行了初步的分析。以農(nóng)桿菌介導FUR4基因轉(zhuǎn)化擬南芥，從DNA、RNA 及蛋白水平上驗證，證實FUR4基因成功轉(zhuǎn)化到擬南芥中并穩(wěn)定遺傳。亞細胞定位表明FUR4 蛋白在細胞膜和細胞核中定位，在細胞質(zhì)中沒有分布。進一步分析FUR4 轉(zhuǎn)基因植株的表型，結(jié)果顯示，F(xiàn)UR4 蛋白導致擬南芥花藥開裂異常，花粉?；钚越档?0%。轉(zhuǎn)基因的果莢長度約為野生型的60%，而

3、結(jié)實率則降低甚至完全敗育。
　　 我們同時研究了擬南芥中與FUR4 在蛋白序列上存在著26%相似性的At5g03555基因。RT-PCR和GUS染色表明，At5g03555 在不同的組織和器官中均有表達，但在花和早期的果莢中表達量最高。亞細胞定位結(jié)果表明，該蛋白在細胞膜和細胞核中定位。
　　 At5g03555 T-DNA 插入突變體的分析結(jié)果顯示，在正常生長條件下，突變體的表型與野生型沒有區(qū)別。但在不同的脅迫條件下，突