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1、—— 坐塞查蘭堡主蘭堡墼 Y ! ! ! ! ! !分類號(hào):密級(jí):?jiǎn)挝淮a:1 0 4 2 2學(xué) 號(hào):2 0 0 3 1 1 4 1 10 ▲芰歲。暑碩士學(xué)位論文論文題目:s u s A 、g a l E 和t g t c 基因轉(zhuǎn)入煙草及轉(zhuǎn)基因植株糖分分析作者姓名張艷芳專 業(yè)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師姓名楊愛(ài)芳專業(yè)技術(shù)職務(wù)副教授2 0 0 6 年4 月2 0 日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要植物作為生物反應(yīng)器具有許多微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)所不具備的
2、優(yōu)點(diǎn):1 ) 可對(duì)真核蛋白進(jìn)行正確的翻譯后加工,形成有活性的分子;2 ) 不需要復(fù)雜的發(fā)酵產(chǎn)物后提取和分離、純化過(guò)程:3 ) 可利用自身豐富的底物,生產(chǎn)成本相對(duì)低廉;4 ) 不涉及公眾目前非常關(guān)心的有關(guān)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物倫理道德的問(wèn)題和產(chǎn)品病毒污染等問(wèn)題。因此,轉(zhuǎn)基因植物將成為一種新的潛力巨大的生物反應(yīng)器。迄今為止,已有大量的有關(guān)利用植物生產(chǎn)活性蛋白用于醫(yī)藥、食品、工業(yè)等領(lǐng)域的可行性文獻(xiàn),也有利用植物生產(chǎn)高附加值碳水化合物和脂類的報(bào)導(dǎo)。植物通過(guò)
3、光合作用在葉中合成糖類物質(zhì),然后從葉中轉(zhuǎn)移到根、( 塊) 莖、籽粒等貯存器官中,采用遺傳改良方法改變植物組織的糖代謝途徑。有可能使植物成為生產(chǎn)高附加值寡糖、多糖和糖蛋白的生物反應(yīng)器。G l o b o 廿i o s e 是一種具有重要價(jià)值的寡糖。在大腸桿菌中.它的合成需要3 個(gè)關(guān)鍵酶基因:1 ) s u s A ,編碼S u c r o s e s y n t h a s e ( E C 2 .4 .I .1 3 ) :2 ) g a
4、l E .編碼U D P - g a l a c t o s e 4 - e p i m e r a s e ( E C5 .1 _ 3 .2 ) ;3 ) l g t C ,編碼小l ,4 - g a l a c t o s y l t r a n s f e r a s e( E C 2 .4 .1 .x ) 。在植物中G l o b o t r i o s e 因缺少這三種酶而不能被合成。本工作擬將上述基因轉(zhuǎn)入模式植物煙草,探討利
5、用轉(zhuǎn)基因煙草合成G l o b o t r i o s e 的可能性。首先將上述基因分別正、反向克隆到植物表達(dá)載體p C A M B I A l 3 0 0 .3 5 S .T r i o s .a(chǎn) /s的印”I 位點(diǎn),共得到6 個(gè)重組質(zhì)粒p l g t C ( + ,.) 、p g a l E ( + 厶) 和p s u s A ( + ,.) 。用攜帶上述質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化煙草無(wú)菌苗葉盤,在加有選擇劑的培養(yǎng)基上篩選后獲得轉(zhuǎn)化植株。對(duì)轉(zhuǎn)
6、化植株進(jìn)行P C R 檢測(cè)和N o r t h e r n 雜交鑒定,證明外源基因已轉(zhuǎn)入煙草并活躍表達(dá)。對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草植株的可溶性總糖分析發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)正義s u s A 基因的煙草植株可溶性糖含量比對(duì)照植株有一定提高,在檢測(cè)的4 個(gè)株系中,除1 個(gè)差異不顯著外,其余3 個(gè)株系均達(dá)差異顯著水平( P ≤O .0 5 ) :這3 個(gè)株系間可溶性糖含量雖有差異,但差異不顯著。轉(zhuǎn)反義s u s A 基因的煙草株系,其可溶性糖含量與對(duì)照株系相比,除1
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