2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、褪黑素(melatonin,MT)是在脊椎動(dòng)物松果體(pinealbody)分泌的一種小分子的神經(jīng).內(nèi)分泌(neuroendocfine)激素。褪黑素作為一種動(dòng)物激素,可以調(diào)節(jié)脊椎動(dòng)物生物節(jié)律和光周期反應(yīng),改善睡眠障礙,增強(qiáng)免疫等,并具有自由基清除劑和廣譜抗氧化劑的作用。目前,在植物方面的褪黑素研究主要局限于對一些植物內(nèi)源褪黑素含量的測定,對褪黑素在植物中的功能研究還剛剛開始,且報(bào)道很少,有關(guān)煙草(常用作轉(zhuǎn)基因操作的模式植物)和中藥植物

2、貫葉連翹(Hpericum peratum L.)的轉(zhuǎn)褪黑素合成關(guān)鍵酶基因報(bào)道尚未見到。 本研究通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化技術(shù),將美國Vanderbilt大學(xué)Xu Yao博士饋贈(zèng)的褪黑素生物合成酶……芳烷基胺N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(.ArylalkylamineN-acetyltransferase,AANAT)與羥基吲哚O-甲基轉(zhuǎn)移酶(HydroxyindoleO-methyltransferase,HIOMT)基因,分別導(dǎo)入煙草和貫葉

3、連翹中,獲得了轉(zhuǎn)基因植株,并測定和分析了兩種轉(zhuǎn)基因植物中褪黑素含量變化,以及外源基因在兩種轉(zhuǎn)基因植株中抗氧化方面的功能。所取得的主要研究結(jié)果如下:  對含有AANAT-HIOMT?;虻闹参锉磉_(dá)載體YXu55進(jìn)行了鑒定,發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒YXu55插入的AANAT基因序列與數(shù)據(jù)庫AANAT基因序列(序列號:L140347)同源性為100%,HIOMT基因序列與數(shù)據(jù)庫HIOMT基因序列(A型,序列號:U11090)的HIOMT基因型A-|5+7型

4、相吻合,同源性為100%;A ANAT與HIOMT基因表達(dá)盒以順式相連,并同方向與慶大霉素抗性基因表達(dá)盒串聯(lián),常用相關(guān)酶切位點(diǎn)多是多位點(diǎn)。 以葉片切塊為外植體,通過不同激素配比的比較研究,建立了貫葉連翹的高效再生體系。在含有2,4.D1.0mg/L,NAA0.1mg/L的MS培養(yǎng)基上10~15d左右即形成愈傷組織且分化能力較強(qiáng),在附加6-BA2.0mg/L,NAA0.2mg/L的MS培養(yǎng)基上可以誘導(dǎo)出大量芽,分化率達(dá)100%,并

5、形成叢生苗。將小苗在附加NAA0.2mg/L的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)10d后即可誘導(dǎo)出根。在根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化過程中,分別探討了外植體預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、pZPl22(僅含慶大霉素抗性標(biāo)記,不含AANAT-HIOMT基因的空白質(zhì)粒)和YXu55(含慶大霉素抗性標(biāo)記和AANAT-HIOMT'基因)兩種農(nóng)桿菌浸染濃度、時(shí)間對煙草和貫葉連翹兩種植物轉(zhuǎn)化頻率的影響。兩種植物外植體分別預(yù)培養(yǎng)2~3d,在OD600=0.5的農(nóng)桿菌菌液感染25min,而后分別在

6、60mg/L和50mg/L的慶大霉素作選擇壓力下,獲得了兩種植物的陽性轉(zhuǎn)基因植株。經(jīng)PCR、Southern印跡分析、RT-PCR分析,證實(shí)褪黑素合成過程中關(guān)鍵酶基因AANAT-HIOMT已經(jīng)整合到煙草和貫葉連翹兩種植物基因組,并能夠在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá)。 建立了檢測植物褪黑素含量的反相高效液相色譜紫外檢測(RP-HPLC)方法。色譜柱為SymmetryCt8(150mmx4.6mm,5.0gm);流動(dòng)相為100mmol/L乙酸銨:

7、甲醇體積比80:20,檢測波長為265.8nm;靈敏度為2.00A[5FS;流速為0.8mL.min-1時(shí),褪黑素濃度在20~500ng-m. (R2=0.9992)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均加樣回收率為98.09%(n=6),RSD=2.21%,最小檢出量為1.0ng.mL-1。褪黑素峰保留時(shí)間約為8min?! ⊥ㄟ^RP-HPLC測定了煙草和貫葉連翹兩種植物不同株系的轉(zhuǎn)基因及其親本(未轉(zhuǎn)基因植株)的褪黑素含量,發(fā)現(xiàn)YXu55(含慶大霉

8、素抗性標(biāo)記和AANAT-HIOMT基因)轉(zhuǎn)基因株系的褪黑素含量均高于pZPl22(僅含慶大霉素抗性標(biāo)記,不含AANAT-HIOMT基因的空白質(zhì)粒)轉(zhuǎn)基因株系和未轉(zhuǎn)基因的對照植株;而pZPl22轉(zhuǎn)基因株系褪黑素含量跟未轉(zhuǎn)基因的對照植株的含量幾乎相等。 用褪黑素含量明顯提高的不同轉(zhuǎn)基因植物株系,分析了植物抗氧化系統(tǒng)的變化,初步得知褪黑素合成過程中的關(guān)鍵酶AANAT-HIOMT基因的導(dǎo)入使植物提高了抗氧化能力。與空白質(zhì)粒pZPl22轉(zhuǎn)

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