雪花蓮凝集素基因轉(zhuǎn)化菊花及轉(zhuǎn)基因植株抗蚜性研究.pdf

1、以菊花(Dendranthema morifolium(Ramat.) Tzvel.)葉片為外植體,用攜帶有雪花蓮凝集素基因的農(nóng)桿菌進行基因轉(zhuǎn)化的研究,獲得了轉(zhuǎn)雪花蓮凝集素基因菊花.對影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)菊花遺傳轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵因素進行了優(yōu)化,并對轉(zhuǎn)基因植株的抗蚜性進行了研究.本實驗共獲得93個陽性克隆,最高轉(zhuǎn)化率為11.21％.對部分轉(zhuǎn)基因植株進行PCR檢測及實時熒光定量PCR檢測分析,結(jié)果表明目的基因已整合到菊花基因組中.抗蚜實驗表明:轉(zhuǎn)基因植

2、株對蚜口密度增長有一定的抑制作用,轉(zhuǎn)基因菊花離體葉片和整株幼苗的平均蚜口密度抑制率分別為38.6％和39.4％.本研究表明:在影響根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的眾多因素當中,農(nóng)桿菌和外植體細胞良好的生長狀態(tài)是保證轉(zhuǎn)化成功的關(guān)鍵.用YEB-1培養(yǎng)基活化農(nóng)桿菌,培養(yǎng)至OD<,600>為0.4時用于侵染,可得到較高的轉(zhuǎn)化率;選用45天苗齡的試管苗,取其中部較大的葉片,在分化培養(yǎng)基中進行1天的預(yù)培養(yǎng),可提高其對農(nóng)桿菌的感受力,從而得到較高的轉(zhuǎn)化率.在轉(zhuǎn)化