抗紋枯病轉基因水稻植株的創(chuàng)制.pdf

1、紋枯病菌(Rhizoctonia solani)是水稻紋枯病的病原菌,由于在自然狀態(tài)下水稻缺乏有效的抗源,該病害有越來越嚴重的趨向,部分地區(qū)的危害程度甚至超過了稻瘟病。隨著分子生物學技術的發(fā)展,利用轉基因技術培育抗紋枯病種質資源的方法已被廣泛采用。
　　 為了挖掘和使用不同類型的基因資源,本課題組之前從稻瘟病菌中克隆了一個幾丁質酶(CHI)基因。實驗表明該基因編碼產(chǎn)物具有較強的活性。此外,紋枯病菌與菌核病菌同為草酸產(chǎn)生菌,課題組

2、之前證實了轉枯草芽孢桿菌的草酸脫羧酶基因(OXD)的模式植物擬南芥增強了對核盤菌的抗性。同時,有報道表明,將幾丁質酶基因和葡聚糖酶基因同時轉入植物中,可以進一步提高植物對病原菌的抗病性。據(jù)此,本研究分別從稻瘟菌ku-70,枯草芽孢桿菌和水稻品種日本晴中克隆了稻瘟菌幾丁質酶基因(CHI),草酸脫羧酶基因(OXD),水稻葡聚糖酶(GLU)基因用于轉基因水稻的研究。
　　 用幾丁質酶基因、葡聚糖酶基因和草酸脫羧酶基因,分別構建了三個植

3、物表達載體pCAMBIA1301-ubi-chi、pCAMBIA1301—ubi-glu和pCAMBIA1301-ubi-oxd。利用農(nóng)桿菌介導轉化法,將稻瘟菌幾丁質酶基因和枯草芽孢桿菌草酸脫羧酶基因轉化到水稻品種明恢86和kitaaki中。經(jīng)提取轉基因水稻基因組DNA的PCR驗證和GUS染色鑒定,結果表明,兩個基因成功被導入水稻植株中。提取轉基因水稻RNA經(jīng)RT-PCR擴增,進一步證實目的基因在水稻植株中成功轉錄。通過對部分T1代的轉