轉(zhuǎn)基因冰草植株檢測(cè)、抗性鑒定及原材料篩選研究.pdf

1、本研究以獲得的轉(zhuǎn)基因冰草植株為材料，通過對(duì)轉(zhuǎn)基因冰草植株的分子檢測(cè)、抗性測(cè)定，獲得轉(zhuǎn)基因冰草植株并確定外源基因在冰草植株中的整合及表達(dá)，為轉(zhuǎn)基因冰草植株的后期研究提供理論依據(jù)；確定轉(zhuǎn)基因植株的抗旱、耐鹽性，篩選抗性強(qiáng)的轉(zhuǎn)基因冰草植株，盡可能短時(shí)間內(nèi)培育出適合我國(guó)西部地區(qū)抗旱、耐鹽的轉(zhuǎn)基因冰草新品種。同時(shí)，通過9種冰草對(duì)干旱脅迫和鹽脅迫的反應(yīng)，篩選出評(píng)價(jià)冰草抗逆性的鑒定指標(biāo)；并通過冰草抗旱、耐鹽性評(píng)價(jià)，選出抗旱、耐鹽性強(qiáng)的冰草品種，為改良

2、我國(guó)西部地區(qū)沙化、鹽漬化現(xiàn)象和進(jìn)一步進(jìn)行冰草的遺傳轉(zhuǎn)化提供基礎(chǔ)材料。 本研究的初步結(jié)果如下： 1．PCR和Southern雜交確定bar、CBF4基因和pSCS基因已整合到冰草基因組中，在轉(zhuǎn)CBF4-bar 冰草植株檢測(cè)中，獲得了29株轉(zhuǎn)bar 基因冰草株系，轉(zhuǎn)化頻率為7.67％：31株轉(zhuǎn)CBF4基因冰草植株，轉(zhuǎn)化頻率為8.20％：其中共轉(zhuǎn)化植株為5株，共轉(zhuǎn)化頻率為1.32％。在轉(zhuǎn)pSCS-bar基因冰草植株中，獲得了2

3、6株轉(zhuǎn)bar基因冰草植株，49株轉(zhuǎn)pSCS基因冰草植株，其中共轉(zhuǎn)化植株為15株，共轉(zhuǎn)化頻率為15.78％。轉(zhuǎn)CBF4部分冰草植株的整合數(shù)為2-5：轉(zhuǎn)bar冰草植株的整合數(shù)為1-3；轉(zhuǎn)pSCS冰草植株的整合數(shù)為1-2。Northern雜交檢測(cè)表明，部分轉(zhuǎn)基因冰草植株中的外源基因在轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)。 2．在干旱脅迫下，轉(zhuǎn)CBF4基因冰草植株較未轉(zhuǎn)基因植株的葉片相對(duì)含水量下降較慢；質(zhì)膜透性、丙二醛含量增加較少；葉綠素含量較高；脯氨酸和可溶

4、性蛋白含量增加較大；SOD、POD、CAT活性較高。轉(zhuǎn)CBF4基因冰草植株抗旱性大于非轉(zhuǎn)基因冰草植株，CBF4基因在轉(zhuǎn)基因冰草植株體內(nèi)表達(dá)。 3．在干旱脅迫和鹽脅迫下，轉(zhuǎn)pSCS基因冰草植株較未轉(zhuǎn)基因植株的葉片相對(duì)含水量下降較慢；質(zhì)膜透性、丙二醛含量增加較少；葉綠素含量較高；脯氨酸和可溶性蛋白含量增加較大：SOD、POD、CAT活性較高。轉(zhuǎn)p5C5基因冰草植株抗旱性、耐鹽性明顯增加，p5CS基因在轉(zhuǎn)基因冰草植株體內(nèi)表達(dá)。

5、 4．不同冰草對(duì)干旱脅迫和鹽脅迫的反應(yīng)程度不同，其抗旱、耐鹽能力的大小是多種代謝的綜合表現(xiàn)，單一的指標(biāo)不能客觀地反映其真實(shí)抗性?？陀^評(píng)價(jià)冰草抗旱、耐鹽性應(yīng)采用多種指標(biāo)進(jìn)行綜合分析。 5．干旱脅迫下，冰草種子萌發(fā)和幼苗抗旱性強(qiáng)弱表現(xiàn)不同，綜合評(píng)價(jià)9種冰草抗旱性強(qiáng)弱順序?yàn)椋?49>738，MN>812>82，1007>790，268>114。適合作為抗旱轉(zhuǎn)基因冰草材料的是：249，MN和738三種冰草。 6．冰草種子和幼苗在