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文檔簡介
1、聚羥基脂肪酸酯(PHA)合成調(diào)控蛋白PhaR由兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域組成:DNA結(jié)合域(DBD)和PHB顆粒結(jié)合域(GBD)。PhaR錨定在PHA顆粒結(jié)合蛋白PhaP的啟動(dòng)子區(qū)域,從而抑制PhaP的表達(dá)。聚羥基丁酸酯(PHB)是PHA最簡單的一類,當(dāng)PHB顆粒在體內(nèi)積累時(shí),PhaR與PHB顆粒結(jié)合促使PhaR從phaP啟動(dòng)子區(qū)域釋放,進(jìn)而催動(dòng)phaP基因的表達(dá)。基于這個(gè)調(diào)控機(jī)制,我們開發(fā)了一種新型的細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)用于檢測蛋白質(zhì)間的相互作用,P
2、haR被分成兩部分:DNA結(jié)合域DBD與誘餌蛋白融合,PHA顆粒結(jié)合域GBD與獵物蛋白融合,phaP被報(bào)告基因β-半乳糖苷酶基因lacZ代替??赡苡捎谑杷园被岬暮窟^高,GBD蛋白在體內(nèi)表達(dá)后形成包涵體。所以,我們用同樣與PHB顆粒有強(qiáng)結(jié)合能力的PhaP替代了GBD.為了研究該系統(tǒng)的可行性,我們選擇了三組相互作用的模式蛋白bFos,bJun與bATF2。通過較高的β-半乳糖苷酶表達(dá)結(jié)果,顯示bFos,bJun與bATF2之間可以兩兩
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