酵母雙雜交方法在研究蛋白酶體中蛋白質(zhì)相互作用時的局限性.pdf

1、一、 酵母雙雜交方法在研究蛋白酶體中蛋白質(zhì)相互作用時的局限性首先用PCR方法獲得相鄰α亞基克隆共三對(α1-α7,α3-α4,α6-α7),分別連接到BD載體和AD載體上,兩兩共同轉(zhuǎn)化酵母菌株GAL4-CG1945,檢測每一對相鄰亞基之間的相互作用,結(jié)果顯示三對中都沒有顯示相互作用的陽性結(jié)果,所以我們信信用酵母雙雜交的方法檢驗蛋白酶體大分子復(fù)合物中單獨的亞基之間相互作用可能不適用.大分子復(fù)合物可能需要通過多個亞基共同作用才維持其整體結(jié)構(gòu)

2、和功能,單獨拿出其中的某個亞基很難保持原有的相互作用.二、酵母雙雜交方法從隨機(jī)多肽庫中篩選與ZO-1的PDZ1結(jié)構(gòu)域相互作用的C-末端配基PDZ在跨膜細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)<'[2,3]>和細(xì)胞骨架的組成方面都發(fā)揮重要作用.位于上皮細(xì)胞的緊密結(jié)合處(tight juncitions TJS)的膜關(guān)聯(lián)的鳥苷酸激酶樣同族物ZO-1含有3個PDZ結(jié)構(gòu)域(PDZ1-3),實驗研究證明PDZ結(jié)構(gòu)域特異結(jié)合配體的C-末端.該實驗就是以位于突觸后膜的ZO-1分