MTX聯(lián)合CTX經(jīng)RORγt介導(dǎo)對CIA小鼠Th17-Treg細(xì)胞平衡的影響.pdf

1、目的：
　　MTX聯(lián)合CTX能否阻斷RORγt信號通道，進(jìn)而調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞平衡，抑制炎癥反應(yīng)。
　　方法:
　　選取雄性 DBA1小鼠56只，隨機(jī)分為正常對照組10只和 CIA組46只。建立CIA模型后根據(jù)擬用藥不同隨機(jī)分為4組：CIA組、MTX組（1.5 mg/kg/3d）、CTX組（30 mg/kg/10d）和MTX+CTX組（聯(lián)合組，MTX：1.5mg/kg/3d， CTX：30mg/kg/10d）加

2、強(qiáng)免疫3周后開始給藥，治療過程中連續(xù)監(jiān)測各組小鼠左踝關(guān)節(jié)腫脹度及關(guān)節(jié)炎指數(shù)（arthritis index, AI）。給藥11周后處死小鼠，取雙膝、左踝關(guān)節(jié)切片，進(jìn)行 HE染色，觀察病理改變。分選脾細(xì)胞中的 Na?ve T細(xì)胞，加入刺激劑于37℃5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96小時，用FCM方法檢測各組Th17和Treg細(xì)胞及其比值；用RT-PCR方法檢測各組RORγt和Foxp3mRNA及其比值。
　　結(jié)果:
　?。?）經(jīng)治

3、療11周后各治療組關(guān)節(jié)腫脹、AI、關(guān)節(jié)病理表現(xiàn)較 CIA組明顯改善，有顯著性差異；聯(lián)合組關(guān)節(jié)腫脹度與CIA組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與CTX、MTX單用藥組相比，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義。聯(lián)合組關(guān)節(jié)AI評分與CIA組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與CTX、MTX單用藥組相比，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義。
　?。?）經(jīng)給藥11周后流式細(xì)胞術(shù)檢測培養(yǎng)后小鼠脾臟 Naive T細(xì)胞中 Th17細(xì)胞所占比例，CIA組較正常對照組

4、Th17細(xì)胞所占比例明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；各治療組較 CIA組 Th17細(xì)胞所占比例降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合組較與CTX、MTX單用藥組降低Th17細(xì)胞，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　（3）經(jīng)給藥11周后流式細(xì)胞術(shù)檢測培養(yǎng)后小鼠脾臟 Naive T細(xì)胞中Treg細(xì)胞所占比例，CIA組較正常對照組 Treg細(xì)胞所占比例明顯減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；各治療組與CIA組

5、相比Treg細(xì)胞降低，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　（4） Th17/Treg可以發(fā)現(xiàn)CIA組較正常對照組Th17/Treg明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；各治療組較 CIA組Th17/Treg顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合組與CTX、MTX單用藥組相比Th17/Treg降低，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　?。?）經(jīng)治療11周后 RT-PCR檢測小鼠分化后 Th17細(xì)胞中RORγt mRN

6、A的表達(dá)水平，CIA組較正常對照組RORγt mRNA所占比例明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；各治療組較 CIA組RORγt mRNA所占比例降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合組較與CTX、MTX單用藥組降低RORγt mRNA，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；經(jīng)治療11周后 RT-PCR檢測小鼠分化后 Treg細(xì)胞中Foxp3mRNA的表達(dá)水平，CIA組較正常對照組Foxp3mRNA所占比例明顯減低，差異有統(tǒng)

7、計學(xué)意義（P＜0.05）；各治療組與CIA組相比Foxp3mRNA降低，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義；通過對RORγt/Foxp3mRNA可以發(fā)現(xiàn)CIA組較正常對照組RORγt/Foxp3mRNA明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；聯(lián)合組較 CIA組RORγt/Foxp3mRNA顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；CTX、MTX單用藥組與CIA組相比RORγt/Foxp3mRNA降低，差異尚無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。