MTX周期聯(lián)合CTX經(jīng)JAK-STAT3通路對CIA小鼠Th17細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：
　　明確MTX周期聯(lián)合CTX是否通過JAK-STAT3通路抑制CIA小鼠脾臟Na?ve T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化。
　　方法：
　　本實驗以DBA1小鼠為研究對象，包括體內(nèi)實驗和體外實驗兩部分。
　　體內(nèi)試驗：選取雄性DBA1小鼠56只，隨機分為正常對照組10只和CIA組46只。建立CIA模型后根據(jù)擬用藥不同隨機分為4組：CIA組、MTX組（1.5 mg/kg/3d）、CTX組（30 mg/kg/10d）

2、和MTX+CTX組（聯(lián)合組， MTX：1.5 mg/kg/3d， CTX：30mg/kg/10d）。加強免疫3周后開始給藥，治療過程中連續(xù)監(jiān)測各組小鼠左踝關(guān)節(jié)腫脹度及關(guān)節(jié)炎指數(shù)d（arthritis index, AI）。給藥11周后處死小鼠，取雙膝、左踝關(guān)節(jié)包埋、切片，進(jìn)行HE染色，觀察病理改變。分選脾細(xì)胞中的Na?ve T細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞因子IL-6、TGF-β1、IL-1β、IL-23刺激于37℃5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96小時，用

3、流式細(xì)胞術(shù)檢測培養(yǎng)后Th17細(xì)胞所占比例，用RT-PCR檢測分化后Th17細(xì)胞中STAT3的表達(dá)水平。
　　體外實驗：選取雄性的DBA1小鼠20只建立CIA模型，7周時處死，分選脾淋巴細(xì)胞中的Na?ve T細(xì)胞，分為空白對照組、抗CD3CD28激活組（激活組）、刺激Th17細(xì)胞定向分化組（Th17分化組）、CTX組、低濃度MTX組（MTX低組）、中濃度MTX組（MTX中組）、高濃度MTX組（MTX高組）、MTX低+CTX組（低聯(lián)合

4、組），在37℃5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)96小時，用流式細(xì)胞術(shù)檢測培養(yǎng)后Th17細(xì)胞所占比例，用RT-PCR檢測分化后Th17細(xì)胞中STAT3的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.體內(nèi)實驗
　　(1)治療前，各治療組小鼠關(guān)節(jié)腫脹度、AI與CIA組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；治療4周后，各治療組小鼠關(guān)節(jié)腫脹度、AI較CIA組改善明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，各治療組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義；治療11周后，聯(lián)合組小鼠關(guān)節(jié)腫脹度、AI較CIA組

5、、CTX組改善明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，聯(lián)合組較MTX組改善明顯，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；
　　(2)治療11周后，各治療組Th17細(xì)胞所占百分較CIA組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，聯(lián)合組Th17百分率較單用藥組降低明顯，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；
　　(3)治療11周后，各治療組Th17細(xì)胞中STAT3 mRNA的表達(dá)均低于CIA組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，聯(lián)合組Th17細(xì)胞中STAT3 mRNA的表達(dá)低于單用藥組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

6、r>　　2.體外實驗
　　(1)體外培養(yǎng)96h后，Th17分化組Th17細(xì)胞所占百分比與空白組、MTX中組、MTX高組、低聯(lián)合組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；低聯(lián)合組與單用藥組相比，培養(yǎng)后Th17細(xì)胞所占百分比降低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；
　　(2)體外培養(yǎng)96h后，Th17分化組Th17細(xì)胞中STAT3 mRNA的表達(dá)與空白組、MTX中組、MTX高組、低聯(lián)合組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；低聯(lián)合組與單用藥組相比，培養(yǎng)后Th17中STAT3