JAK-STAT3信號通路在鸚鵡熱嗜衣原體抑制細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：研究 JAK/STAT3信號通路在鸚鵡熱嗜衣原體（Chlamydophila psittaci，Cps）抑制細(xì)胞凋亡中的作用，為進(jìn)一步明確衣原體的致病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：以 MOI為3的 Cps感染 HeLa細(xì)胞，用星狀孢子素（Staurosporine，STS）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時設(shè)未誘導(dǎo)組和HeLa細(xì)胞空白對照組。運用DNA ladder法和熒光染色法檢測細(xì)胞凋亡情況；運用 RT-qPCR（ rever

2、se transcription quantitative polymerase chain reaction）及Western blot法檢測各組STAT3、JAK1及JAK2的mRNA及其蛋白表達(dá)水平。
　　用 JAK/STAT3信號通路特異性抑制劑 AG490作用于 Cps感染HeLa細(xì)胞，加入星狀孢子素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。采用熒光染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡情況。Western blot檢測各組細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2

3、、Bax及Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9、PARP的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：Cps感染細(xì)胞較正常HeLa細(xì)胞組DNA條帶明顯減弱，且未出現(xiàn)梯狀條帶；Hoechst33258細(xì)胞核染結(jié)果也顯示Cps感染細(xì)胞內(nèi)凋亡小體數(shù)量明顯減少，細(xì)胞形態(tài)接近于正常，顯示Cps一定的抗凋亡作用。STAT3基因在 Cps感染后第6h和第12h明顯上調(diào)，JAK1基因在第4h明顯上調(diào)，JAK2基因在第2h明顯上調(diào)。Western

4、blot檢測STAT3、JAK1及其磷酸化水平，發(fā)現(xiàn)在Cps感染后STAT3、JAK1 總蛋白和磷酸化蛋白水平均顯著上調(diào)。
　　熒光染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率，發(fā)現(xiàn)AG490抑制Cps感染組的細(xì)胞凋亡率顯著低于 STS誘導(dǎo) Cps感染組而明顯高于 Cps感染細(xì)胞組。Western blot檢測相關(guān)凋亡蛋白結(jié)果顯示，AG490抑制Cps感染細(xì)胞組Bax/Bcl-2比值、Caspase-3、Caspase-7、Casp