鸚鵡熱衣原體持續(xù)性感染經(jīng)Bcl-2家族蛋白和ERK抑制HeLa細胞凋亡.pdf

1、背景與目的：細胞凋亡是機體清除病原微生物感染的重要防御機制。本課題組的前期研究表明鸚鵡熱衣原體（Cps）感染HeLa細胞后，可通過抑制其凋亡而發(fā)揮持續(xù)性感染，但其機制尚不明確，本研究旨在觀察人重組干擾素-γ（rhIFN-γ）誘導Cps6BC持續(xù)感染條件下，觀察其對HeLa細胞凋亡相關蛋白表達的影響，從而初步闡明Cps持續(xù)性感染對凋亡的調(diào)節(jié)機制。
　　方法：體外培養(yǎng)HeLa細胞，加入MOI為2的Cps6BC菌株和35ng/mL rh

2、IFN-γ誘導持續(xù)性感染，分別于感染后0、4、8、12、24h收集細胞進行Hochest33258和TUNEL熒光染色觀察HeLa細胞凋亡情況；采用間接免疫熒光染色實驗（IFA）檢測核形態(tài)以及細胞色素c（Cyt.C）和線粒體膜電位（MMP）的變化，同時采用Western blot檢測Cps持續(xù)性感染對HeLa細胞中Fas、Fas-L、Caspase8、Caspase3、Cyt.C、tBid、Bad、Bim、Mcl-1表達水平及ERK磷酸

3、化的影響。
　　結果：
　　（1）Cps6BC持續(xù)性感染HeLa細胞0、4、8、12、24h，Hochest33258和TUNEL染色結果顯示其凋亡率明顯降低，但感染24h后凋亡率有所增高但仍低于對照水平；
　?。?）而Cps持續(xù)性感染20h后能顯著抑制STS對HeLa凋亡的誘導效應，形態(tài)學上Cps持續(xù)感染的細胞核與正常HeLa細胞核大小、形態(tài)無明顯差異；
　?。?）Cps持續(xù)感染4h后Caspase3表達逐漸增

4、加，而其活性形式（Cleaved Caspase3）隨著時間的延長而逐漸降低；
　?。?）未感染細胞Mcl-1和Bad表達較低。Cps持續(xù)性感染4h后，Mcl-1逐漸增加，并持續(xù)至24h。而Cps持續(xù)性感染4h后，胞內(nèi)Bad表達明顯增高，但在4～24h內(nèi)呈恒定表達；
　?。?）Cps持續(xù)感染4h后，可顯著抑制CCCP誘導HeLa釋放Cyt.C，并持續(xù)至24h；此外，Cps持續(xù)性感染后也能一定程度削弱CCCP對MMP的影響；<

5、br>　　（6）隨著Cps持續(xù)性感染時間的延長，HeLa細胞BimEL水平隨之降低，Bims表達增高。同時細胞內(nèi)tBid、Cyt.C的表達水平也隨著感染時間的延長而逐漸減少；
　?。?）隨持續(xù)性感染時間的延長，HeLa細胞內(nèi)Fas及其配體Fas-L的表達水平逐漸減少。細胞內(nèi)Caspase8,其活性形式Cleaved Caspase8含量也隨持續(xù)性感染時間延長而降低；
　?。?）Cps持續(xù)性感染4～24h，磷酸化ERK水平隨著