金邊瑞香活性成分瑞香素對CIA的治療及Th17細胞調節(jié)的研究.pdf

1、目的:觀察金邊瑞香活性成分瑞香素對膠原誘導的關節(jié)炎(collagenⅡ-induced arthritis,CIA)大鼠的抑制作用,探討金邊瑞香活性成分瑞香素對CIA中Th17細胞的調節(jié)作用,為研制RA的新藥提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法:1.動物分組選用健康雌性SPF級Wistar大鼠48只,體重170g±10g,隨機分為健康對照組、CIA模型組、瑞香素高、中、低劑量治療組及CIA陽性對照組共6組,每組8只:2.建立CIA模

2、型將牛Ⅱ型膠原蛋白溶于0.5mol/L醋酸中,加入等量弗氏不完全佐劑乳化配成濃度為0.25mg/mL的Ⅱ型膠原蛋白乳劑,于左足底皮內注射0.1mL,21天后同法加強免疫1次;3.藥物治療于第一次免疫的第20天開始用藥治療,瑞香素高、中、低治療組分別采取4、2、1mg/kg.d的瑞香素腹腔注射,CIA陽性對照組采用0.4mg/kg.d的雷公藤甲素腹腔注射;CIA模型組和健康對照組則注射等量的無菌生理鹽水,治療21天;4.檢測如下指標:(1

3、)測量各實驗組鼠體重;(2)采用YLS-7B足趾容積測量儀測量各實驗組鼠免疫足足趾的體積,計算腫脹率;(3)采用PLANMECA TNTRA X線攝片機對各實驗組鼠免疫足進行X線拍攝,以觀察各組大鼠關節(jié)局部病變;(4)采用病理組織學H-E染色分析各實驗組鼠關節(jié)局部病變程度:(5)采用流式細胞術檢測各實驗組鼠脾T淋巴細胞內RORγt、Foxp3、TGF-β、IL-6、IL-4、IFN-γ和NF-kB水平。
　　 結果:1.健康對照

4、組、CIA模型組、CIA陽性對照組、及瑞香素高、中、低劑量組大鼠經(jīng)治療21天后平均體重(g)分別為191.00±6.78、189.38±6.12、193.5±10.10、187.11±6.09、194.50±10.92、195.00±7.59;各組間比較,平均體重均無顯著性差異(P＞0.05);2.經(jīng)金邊瑞香素治療后,金邊瑞香素高、中、低劑量組大鼠在第24天至第40天免疫足腫脹率均顯著低于CIA模型組(P＜0.05);金邊瑞香素高、中、

5、低劑量組大鼠在第24天至第40天與CIA陽性對照組比較,免疫足腫脹率無顯著性差異(P＞0.05);3.X線顯示金邊瑞香素高、中、低劑量組鼠免疫足軟組織輕度腫脹,關節(jié)稍增粗,關節(jié)間隙明顯,骨關節(jié)邊緣界限清晰,而CIA模型組免疫足X線表現(xiàn)軟組織腫脹明顯,關節(jié)增粗,關節(jié)間隙變窄,骨關節(jié)邊緣模糊不清;4.H-E染色后金邊瑞香素高、中、低劑量組鼠滑膜關節(jié)結構可見輕度破壞,關節(jié)間隙輕度狹窄,但關節(jié)軟骨表面較完整,未見明顯滑膜細胞增生,有少量炎性細胞

6、浸潤,但未見纖維組織增生和血管翳形成;而CIA模型組則顯示滑膜關節(jié)結構明顯破壞,關節(jié)間隙狹窄,關節(jié)軟骨細胞體積增大甚至軟骨表面被破壞,可見大量炎性細胞浸潤及纖維組織增生,可見血管翳侵蝕關節(jié)軟骨和軟骨下骨等組織引致骨關節(jié)軟骨破壞、軟骨下骨溶解;5.金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細胞內RORγt和IL-6水平低于CIA模型組,差異有顯著性(P＜0.05),但與CIA陽性對照組比無顯著性差異(P＞0.05);金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T

7、淋巴細胞內Foxp3水平高于CIA模型組和CIA陽性對照組(P＜0.05):金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細胞內TGF-β水平低于CIA模型組和CIA陽性對照組,差異均有顯著性(P＜0.05),而與健康對照組比均無顯著性差異(P＞0.05);金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細胞內IL-4水平低于CIA模型組和CIA陽性對照組,差異均有顯著性(P＜0.05);金邊瑞香素高、中、低劑量組脾T淋巴細胞內IFN-γ水平低于CIA模型組,差

8、異有顯著性(P＜0.05),其中高劑量組與CIA陽性對照組比無顯著性差異(P＞0.05);各實驗組間大鼠脾T淋巴細胞內NF-κB陽性細胞百分率無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結論:1.金邊瑞香素對Wistar大鼠體重無明顯影響;2.金邊瑞香素在1～4mg/kg.d范圍內對CIA大鼠足腫脹有較明顯的抑制作用;3.金邊瑞香素有助于改善CIA大鼠關節(jié)局部病變程度;4.金邊瑞香素可通過降低CIA大鼠脾T淋巴細胞內RORγt、TGF