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1、目的:探討維生素D3對(duì)IgA腎病大鼠Th17/Treg平衡的調(diào)節(jié)作用。
方法:采用脂多糖(LPS)+牛血清白蛋白(BSA)+四氯化碳(CCL4)聯(lián)合造模方法,建立IgA腎病大鼠模型。正常對(duì)照組予同等量蒸餾水灌胃及同等量生理鹽水皮下及尾靜脈注射。于實(shí)驗(yàn)第10周起,將造模組分為強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組及模型組:強(qiáng)的松治療組每日上午予強(qiáng)的松10mg/kg灌胃,1,25(
2、OH)2D3治療組每日上午予1,25(OH)2D33ng/100g灌胃,強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組每日上午予強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3灌胃,劑量同前。模型組及正常對(duì)照組每日予同等量蒸餾水灌胃。檢測(cè)各組大鼠24小時(shí)尿蛋白、尿紅細(xì)胞及腎組織病理改變,并用ELISA方法檢測(cè)血清IL-17水平,流式細(xì)胞儀檢測(cè)血液Treg細(xì)胞水平。
結(jié)果:(1)維生素D3對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠24小時(shí)尿蛋白和血尿的影響:正常對(duì)照組、模型組、強(qiáng)
3、的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組24小時(shí)尿蛋白分別為8.9±1.48 mg/d、47.34±5.11mg/d、11.75±2.11mg/d、22.03±3.09mg/d、11.19±2.35mg/d,模型組較正常對(duì)照組、強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組均顯著增高(p<0.01),1,25(OH)2D3治療組較模型組下降(p<0.01),
4、1,25(OH)2D3治療組較強(qiáng)的松治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組高(p<0.01),強(qiáng)的松治療組較強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組無(wú)顯著差異(p>0.1)。正常對(duì)照組、模型組、強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為8.46±3.45個(gè)/μl、492.31±21.21個(gè)/μl、12.49±2.36個(gè)/μl、269.18±49.25個(gè)/μl、10.7
5、7±2.77個(gè)/μl,模型組較正常對(duì)照組、強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組均顯著增高(p<0.01),1,25(OH)2D3治療組較模型組下降(p<0.01),1,25(OH)2D3治療組較強(qiáng)的松治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組高(p<0.01),強(qiáng)的松治療組較強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組無(wú)顯著差異(p>0.1)。
(2)維生素D3對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠腎
6、臟病理的影響:模型組大鼠腎組織病理顯示腎小球系膜區(qū)細(xì)胞及基質(zhì)中至重度增多,毛細(xì)血管管腔狹窄,部分腎小球可見(jiàn)細(xì)胞新月體形成及炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、刷狀緣脫落,腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn);正常對(duì)照組大鼠腎組織大致正常;強(qiáng)的松治療組大鼠腎組織病變減輕,表現(xiàn)為腎小球系膜細(xì)胞及基質(zhì)輕度增多,部分腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、刷狀緣脫落,腎間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);1,25(OH)2D3治療組腎組織病理改變無(wú)明顯減輕,腎小球系膜細(xì)胞及基質(zhì)增多,部分毛
7、細(xì)血管管腔狹窄,偶可見(jiàn)腎小球細(xì)胞新月體形成,部分腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、刷狀緣脫落,腎間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);而強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組病變明顯減輕,腎小球系膜區(qū)細(xì)胞及基質(zhì)輕度增多,偶見(jiàn)正常腎小球,少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、刷狀緣脫落。腎組織免疫熒光顯示模型組大鼠腎小球系膜區(qū)可見(jiàn)較強(qiáng)黃綠色I(xiàn)gA熒光呈線狀或顆粒狀沉積,說(shuō)明IgA腎病大鼠模型復(fù)制成功,且模型組IgA熒光強(qiáng)度最強(qiáng),1,25(0H)2D3治療組、強(qiáng)的松治療組、
8、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組、IgA熒光強(qiáng)度依次減弱,強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組IgA熒光強(qiáng)度最弱,與強(qiáng)的松治療組存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),強(qiáng)的松治療組較1,25(OH)2D3治療組IgA熒光強(qiáng)度弱(P<0.05)。
(3)維生素D3對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠IL-17及Treg的影響:正常對(duì)照組、模型組、強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組血清IL-17
9、水平分別為35.13±2.97pg/ml、61.04±3.96pg/ml、41.43±2.74pg/ml、37.27±3.04pg/ml、34.49±2.51pg/ml,模型組血清IL-17水平較正常對(duì)照組、強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組及強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組顯著增高(p<0.01);強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(0H)2D3聯(lián)合治療組血清IL-17水平依次下降,1,25(
10、OH)2D3治療組及強(qiáng)的松+1,25(oH)2D3聯(lián)合治療組較強(qiáng)的松治療組較低(P<0.05),強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組較1,25(OH)2D3治療組低,但結(jié)果無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.1)。正常對(duì)照組、模型組、強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組血液Treg細(xì)胞水平分別為5.53±1.03%、1.20±0.49%、3.28±0.71%、4.55±0.49%、5.30±0.
11、68%,模型組Treg細(xì)胞水平較正常對(duì)照組、強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組顯著降低(p<0.01);強(qiáng)的松治療組、1,25(OH)2D3治療組、強(qiáng)的松+1,25(OH)2D3聯(lián)合治療組Treg細(xì)胞水平依次上升,1,25(OH)2D3治療組及強(qiáng)的松+1,25(0H)2D3聯(lián)合治療組較強(qiáng)的松治療組高(p<0.01),強(qiáng)的松+1,25(0H)2D3聯(lián)合治療組較1,25(OH)2D3治療組高
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