Th17-Treg免疫平衡在特發(fā)性膜性腎病發(fā)病中的作用及環(huán)孢素A對其影響.pdf

1、目的:
　　 特發(fā)性膜性腎病(IMN)是成人腎病綜合征(NS)的常見病因之一。IMN的發(fā)病機制目前尚不完全清楚。來自人類和Heymann腎炎的研究表明,它是一種B細胞活化、抗原抗體介導(dǎo)的器官特異的自身免疫疾病。動物實驗證實,CD4+T細胞在Heymann腎炎的發(fā)病中起到重要作用。CD4+輔助性T細胞(Th)是一類重要的免疫調(diào)節(jié)細胞,它對維持機體的免疫平衡發(fā)揮重要作用。傳統(tǒng)觀念將CD4+Th細胞分為Th1和Th2兩類細胞亞群。近年

2、來,人們發(fā)現(xiàn)另外兩類新的Th細胞亞群,即調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)和輔助T細胞17(Th17)。Treg和Th17細胞都來源于初始T細胞,兩者的功能和分化過程相互對抗,它們在維持機體免疫平衡方面發(fā)揮重要作用,是對Th1/Th2免疫平衡理論的重要補充。Th17/Treg免疫失衡在炎癥、感染、腫瘤、自身免疫性疾病等多種疾病狀態(tài)中的報道已有不少,但在NS中的研究尚屬少見。此外,環(huán)孢素A(CsA)是治療IMN有效的藥物。目前已有報道CsA治療自身

3、免疫性疾病和器官移植術(shù)后對Th17/Treg免疫平衡產(chǎn)生影響,并與臨床療效相關(guān),但尚無CsA治療IMN對Th17/Treg免疫平衡影響的相關(guān)報道。因此,本研究的目的就是要觀察IMN患者Th17/Treg免疫平衡的變化,及CsA治療IMN對Th17/Treg平衡的影響,探討其與IMN發(fā)病機制及治療反應(yīng)和預(yù)后間的關(guān)系。
　　 方法:
　　 選擇49例臨床和病理確診為IMN,排除各種繼發(fā)性腎臟疾病的患者為研究對象。28例性別、

4、年齡匹配的健康人為對照組。以流式細胞儀檢測外周血輔助T細胞亞群(Treg/Th17/Th1/Th2)、B細胞、T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+)的計數(shù)和/或百分率。流式方法檢測Treg表面CD127、CD39和CD73的表達率。以Real-time RT-PCR方法檢測外周血單個核細胞(PBMC)核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3和RORyt的表達量。采用ELISA方法檢測血漿中細胞因子的水平。體外共培養(yǎng)實驗檢測IMN患者和正常人外周血CD4

5、+CD25+T細胞的抑制功能。分析Th細胞亞群與相關(guān)細胞因子、臨床指標間的相關(guān)性。免疫組化方法檢測腎組織Treg浸潤和IL-17的表達。觀察19例入組IMN患者經(jīng)CsA聯(lián)合糖皮質(zhì)激素(簡稱激素)治療后外周血Treg和Th7細胞及其他T、B淋巴細胞亞群百分率的變化。體外實驗觀察不同濃度CsA和甲基強的松龍(MP)及二者聯(lián)合對正常人Treg和Th17細胞的作用。
　　 結(jié)果:
　　 (1)IMN患者外周血Treg細胞百分率和

6、血漿TGF-β1水平較正常對照顯著降低,而Th2、Th17及B細胞百分率、血漿IL-23和IL-17水平顯著升高(p<0.05)。核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3和RORγt在PBMC中的表達量與Treg和Th17的百分率變化趨勢相同。
　　 (2)IMN患者血漿TGF-β1與Treg百分率呈明顯正相關(guān)(r=0.311,p=0.029),而IL-23與Th17百分率也呈明顯正相關(guān)(r=0.347,p=0.014)。
　　 (3)IM

7、N患者外周血Treg表型改變特點:表面功能分子CD39表達率較正常對照顯著降低(p<0.05)。但仍然保持CD25高表達和CD127低表達的特點,與對照組無差別。
　　 (4)與正常對照組比較,IMN患者外周血CD4+CD25+T細胞體外抑制CD4+CD25-效應(yīng)T細胞增殖的能力減低,并且CD4+CD25+T細胞抑制B細胞分泌IgG的能力降低。
　　 (5)IMN患者外周血Th17/Treg比值與尿蛋白呈明顯正相關(guān)(r=

8、0.294,p=0.036),而與血清白蛋白呈明顯負相關(guān)(r=-0.323,p=0.024)。
　　 (6)根據(jù)患者隨訪6個月時尿蛋白是否達到部分緩解(小于3.5g/24h)將入選病例分為有效組和無效組兩組比較,發(fā)現(xiàn)無效組治療前尿蛋白水平、CD4/CD8比值、Th17/Treg比值顯著高于有效組(p<0.05)。
　　 (7)IMN患者腎組織彌漫表達IL-17,較正常。腎組織明顯升高(p<0.05)。正常腎組織內(nèi)未觀察到

9、Foxp3+Treg浸潤,而部分IMN患者腎間質(zhì)灶狀單個核細胞浸潤的部位同時可見Foxp3+Treg細胞浸潤,并且伴有腎間質(zhì)Foxp3+Treg浸潤的患者經(jīng)治療后絕大部分獲得臨床緩解。
　　 (8)CsA聯(lián)合激素治療IMN隨著病情好轉(zhuǎn),外周血Th17/Treg比值和血漿TGF—β1水平逐漸恢復(fù)正常,B細胞和Th2百分率均顯著降低。
　　 (9)體外CsA抑制TGF-β誘導(dǎo)Treg的分化和Th17的表達,并隨劑量的增加作用

10、增強。甲基強的松龍(MP)與CsA聯(lián)合作用后,能增強CsA對,Th17的抑制,而減輕其對Treg的抑制。
　　 結(jié)論:
　　 IMN患者體內(nèi)存在Th17/Freg免疫平衡異常,主要表現(xiàn)為外周血Treg細胞百分率和功能的降低,而Th17細胞的百分率和腎臟局部表達增高。IMN中Th2細胞輔助B細胞過度活化的過程中,Treg細胞的功能缺陷也可能起到一定作用。腎臟局部Treg細胞浸潤與預(yù)后的關(guān)系值得進一步探討。CsA治療IMN隨