E1A激活基因阻遏子抑制大鼠視網(wǎng)膜光損傷感光細胞凋亡及其機制的研究.pdf

1、目的：
　　研究CREG蛋白對抗大鼠視網(wǎng)膜感光細胞光損害的作用，客觀評價其抗凋亡的能力，探索CREG在感光細胞光損傷中的抗凋亡機制。
　　方法：
　　1、造模：選取健康wistar大鼠30只,雌雄不限,將其隨機分成3組，對照組、光照1周組和光照2周組，每組10只。對3組大鼠鼠眼的冰凍切片行HE染色，確立模型為光照一周組。
　　2、提取光照1周組和對照組大鼠視網(wǎng)膜蛋白，為檢測感光細胞凋亡的途徑，用Western b

2、lot檢測MAPK信號通路中關(guān)鍵蛋白ERK、P38、JNK及其磷酸化的表達量。
　　3、選取30只wistar大鼠隨機分成3組，制備光損傷模型，制備完畢后將4μlCREG蛋白和4μlPBS分別注入大鼠的左右眼玻璃體腔。注射后第1天、3天、7天摘取鼠眼，行冰凍切片及HE染色，提取大鼠視網(wǎng)膜蛋白，Western blot檢測大鼠視網(wǎng)膜蛋白中凋亡因子casepase3、8、9的表達量。
　　4、Western blot檢測MAPK

3、凋亡通路及PI3K/AKT通路中關(guān)鍵蛋白P38、JNK、AKT及它們的磷酸化形式的表達量。將P38抑制劑SB203580，JNK抑制劑SP600125，AKT抑制劑LY2940002對3天組大鼠注射CREG蛋白眼進行玻璃體腔注射，劑量為4μl，對照組注射同等劑量的PBS。Western blot檢測兩組中Caspase3的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、光照1周組視網(wǎng)膜外核層細胞較對照組變薄，光照2周視網(wǎng)膜外核層細胞消失。<

4、br>　　2、光照1周組的大鼠視網(wǎng)膜蛋白中p-P38、p-JNK的表達量較對照組的明顯增加（P<0.001），P38、JNK、ERK、p-ERK的表達量較對照組無明顯變化。
　　3、CREG蛋白注射3天組較對照組視網(wǎng)膜外核層細胞凋亡減少，而1天組和7天組無明顯變化。
　　4、CREG蛋白注射3天組大鼠的p-JNK、p-P38、較對照組明顯減少（P<0.001），p-AKT表達量明顯增加（P<0.001）。而1天組和7天組較對