碘酸鈉致視網(wǎng)膜感光細(xì)胞變性機(jī)制的研究.pdf

1、目的:研究碘酸鈉對(duì)神經(jīng)視網(wǎng)膜感光細(xì)胞的作用并探討碘酸鈉引起感光細(xì)胞變性的機(jī)制。
　　方法:成年18-20g C57BL/6J小鼠腹腔注射50mg/kg碘酸鈉建立RP模型，分別在注射后6h、12h、1d、3d、5d和7d處死動(dòng)物，取視網(wǎng)膜組織進(jìn)行檢查，以正常小鼠作為對(duì)照。HE染色觀察視網(wǎng)膜組織的形態(tài);透射電鏡觀察視網(wǎng)膜細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu);免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)神經(jīng)視網(wǎng)膜中視細(xì)胞功能蛋白OPSD的表達(dá);DHE染色檢測(cè)視網(wǎng)膜組織ROS水平;T

2、UNEL染色檢測(cè)視網(wǎng)膜中細(xì)胞的凋亡。以Western Blot檢測(cè)視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞中RPE65、RLBP1，神經(jīng)視網(wǎng)膜中NOX4、Nrf2、NQO1、5-lipoxygenase和caspase3蛋白表達(dá)的變化。以qRT-PCR檢測(cè)RPE細(xì)胞中RPE65、RLBP1，神經(jīng)視網(wǎng)膜中OPSD、NOX4的mRNA的表達(dá)變化。分別用PBS、不同濃度的碘酸鈉、apocynin(NOX抑制劑，10u M)作用于視網(wǎng)膜感光細(xì)胞系661W細(xì)

3、胞，24h后分別以MTS檢測(cè)661W細(xì)胞的活性，Western Blot和qRT-PCR檢測(cè)661W細(xì)胞的NOX4表達(dá)變化，TUNEL染色檢測(cè)661W細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果:碘酸鈉注射后小鼠神經(jīng)視網(wǎng)膜與RPE同時(shí)出現(xiàn)形態(tài)變化。正常小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)清楚，各層排列規(guī)則。碘酸鈉注射后，6h時(shí)，小鼠RPE及神經(jīng)視網(wǎng)膜外核層的形態(tài)出現(xiàn)輕微變化，RPE細(xì)胞核染色質(zhì)聚集，感光細(xì)胞內(nèi)節(jié)腫脹;12h時(shí)，RPE細(xì)胞的變化與6h相似，感光細(xì)胞內(nèi)節(jié)出現(xiàn)

4、許多空泡;1d時(shí)，RPE細(xì)胞核消失，感光細(xì)胞外節(jié)嚴(yán)重水腫，片層結(jié)構(gòu)消失，內(nèi)節(jié)嚴(yán)重破壞，結(jié)構(gòu)紊亂，外核層出現(xiàn)核固縮細(xì)胞核，細(xì)胞核之間空隙增大，排列松散;3d時(shí)，RPE細(xì)胞層明顯變薄;5d時(shí)RPE細(xì)胞層結(jié)構(gòu)破壞，感光細(xì)胞內(nèi)外節(jié)結(jié)構(gòu)破壞，外核層細(xì)胞核排列紊亂;7d時(shí)RPE層及視網(wǎng)膜外核層的形態(tài)變化更加顯著，RPE層細(xì)胞被完全破壞，視網(wǎng)膜外核層結(jié)構(gòu)紊亂更加明顯。與正常小鼠視網(wǎng)膜組織相比，碘酸鈉注射后小鼠的RPE中RPE65的表達(dá)水平在6h及12

5、h時(shí)顯著高于正常對(duì)照組，1d時(shí)恢復(fù)到正常水平，1d以后逐漸下降;RLBP1在碘酸鈉注射后6h及12h時(shí)表達(dá)有輕微的升高，1d以后明顯下降。神經(jīng)視網(wǎng)膜中的OPSD表達(dá)從6h至7d逐漸減少。NOX4的mRNA和蛋白表達(dá)從6h至7d均顯著高于正常視網(wǎng)膜，以6h和12h最為明顯;ROS的水平顯著升高，尤其是在外核層;Nrf2的表達(dá)在12h時(shí)顯著升高，1d至7d表達(dá)維持在更為顯著的高水平，NQO1在碘酸鈉注射后1d時(shí)顯著升高，此后維持在更為顯著的