人成體干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成視網(wǎng)膜感光細(xì)胞樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】比較人眼眶脂肪組織來源干細(xì)胞與牙周韌帶來源干細(xì)胞定向分化至視網(wǎng)膜感光細(xì)胞樣細(xì)胞的能力。探索通過組織塊培養(yǎng)法從人眼眶脂肪組織原代培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞的方案及技術(shù)。比較通過組織塊培養(yǎng)法和酶消化法獲取的人眼眶脂肪組織來源干細(xì)胞向視網(wǎng)膜感光細(xì)胞樣細(xì)胞定向分化的能力。
　　【方法】擴(kuò)增培養(yǎng)通過酶消化法獲取的人眼眶脂肪組織來源干細(xì)胞株和牙周韌帶來源干細(xì)胞細(xì)胞株,檢測(cè)其細(xì)胞表面的干細(xì)胞標(biāo)記。然后使用多種培養(yǎng)基對(duì)兩種不同組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞

2、進(jìn)行定向誘導(dǎo),使其向視網(wǎng)膜感光細(xì)胞分化,在不同時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞,檢測(cè)視網(wǎng)膜感光細(xì)胞特異性基因和蛋白表達(dá)。比較這兩種細(xì)胞向視網(wǎng)膜感光細(xì)胞定向分化的能力。繼而通過組織塊培養(yǎng)法和酶消化法從人眼眶脂肪組織中分離脂肪組織來源干細(xì)胞,并通過免疫熒光染色檢測(cè)其干細(xì)胞標(biāo)記物。對(duì)通過不同方法獲得的脂肪組織來源干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),誘導(dǎo)其向視網(wǎng)膜感光細(xì)胞分化,在不同時(shí)間點(diǎn)收獲細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞中視網(wǎng)膜感光細(xì)胞特異性基因和蛋白表達(dá),比較兩種細(xì)胞的分化能力。
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3、結(jié)果】通過酶消化法獲得的人眼眶脂肪組織來源干細(xì)胞株和牙周韌帶來源干細(xì)胞株接受定向誘導(dǎo)分化后,前者表現(xiàn)出類似視網(wǎng)膜感光細(xì)胞外段樣結(jié)構(gòu);后者的細(xì)胞形態(tài)無顯著改變。牙周韌帶來源干細(xì)胞表達(dá)Pax6基因早于脂肪組織來源干細(xì)胞,但是表達(dá)Rhodopsin基因及視紫紅質(zhì)蛋白晚于脂肪組織來源干細(xì)胞。本研究成功地通過組織塊培養(yǎng)法從人眼眶脂肪組織中原代培養(yǎng)出脂肪組織來源干細(xì)胞。通過組織塊培養(yǎng)法和酶消化法獲取的人眼眶脂肪組織來源干細(xì)胞接受誘導(dǎo)分化后,均表現(xiàn)出