臍血單個(gè)核細(xì)胞體外定向分化成肝樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)探討體外采用細(xì)胞因子誘導(dǎo)臍血單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)定向分化為肝細(xì)胞的可能性。分離、純化臍血中的MNCs，采用干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、制瘤素M、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子、白血病抑制因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-1、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2體外定向分化MNCs。采用半定量RT-PCR和免疫組化鑒定肝細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)情況。結(jié)果表明在細(xì)胞因子的作用下，臍血MNCs能夠在體外定向分化為肝樣細(xì)胞。而在無細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系中，臍血MNCs不能在體外定向分化為肝樣細(xì)胞。

2、 目的 分別在體外采用有細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系和無細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系，觀察肝細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)，探討體外采用細(xì)胞因子誘導(dǎo)臍血單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)定向分化為肝細(xì)胞的可能性。 方法 將49份臍血采用6％羥乙基淀粉、淋巴細(xì)胞分離液分離、純化臍血中的MNCs，分為7組，每組7份。按以下方法處理：1組未培養(yǎng)；2、3、4組加細(xì)胞因子HSCF、HOSM、HHGF、HLIF、HFGF-1、HFGF-2分別培養(yǎng)7、14、21天

3、；5、6、7組不加細(xì)胞因子培養(yǎng)7、14、21天。分別抽提各組細(xì)胞總RNA，采用半定量RT-PCR方法分析各組細(xì)胞ALB、GS、AFPmRNA的表達(dá)情況。另提取2份臍血中的MNCs，接種于玻片上，一份培養(yǎng)液中加入細(xì)胞因子，另一份無細(xì)胞因子，分別培養(yǎng)21天后行免疫組化，觀察兩種培養(yǎng)方法下，白蛋白抗體的表達(dá)情況。 結(jié)果 1、在有細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系中，RT-PCR提示體外培養(yǎng)14天、21天的細(xì)胞均表達(dá)白蛋白mRNA，21天的量約

4、為14天量的1.5倍；培養(yǎng)21天的細(xì)胞表達(dá)白蛋白、谷氨酰胺合成酶、細(xì)胞角蛋白-18、甲胎蛋白。而在無細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系，無上述產(chǎn)物的表達(dá)。 2、在有細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系中，體外培養(yǎng)了14天、21天的細(xì)胞免疫組化提示均有白蛋白抗體陽性表達(dá)；在無細(xì)胞因子的培養(yǎng)體系中，體外培養(yǎng)了21天的細(xì)胞免疫組化未見白蛋白抗體陽性表達(dá)。 結(jié)論 1、新鮮臍血中沒有肝樣細(xì)胞存在。 2、在無細(xì)胞因子的作用下，臍血MNCs不能定向分化