BRD7參與小鼠炎癥發(fā)生的功能及機(jī)制研究.pdf

1、[研究目的]
　　BRD7是我室自主克隆的全長(zhǎng)新基因，10余年來(lái)的工作基礎(chǔ)證實(shí)BRD7是一個(gè)抑瘤基因和核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，通過(guò)調(diào)控多種靶基因參與不同的信號(hào)通路，從而表現(xiàn)出不同的生物學(xué)表型，如炎癥，發(fā)育，生殖及腫瘤發(fā)生。近年來(lái)的研究表明，很多抑癌基因如PTEN、P53、PDCD4等不僅與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而且參與了免疫反應(yīng)和炎性疾病等正常生理和病理過(guò)程。因此，在前期成功構(gòu)建BRD7基因敲除小鼠模型的基礎(chǔ)上，本研究擬探討B(tài)RD7在小

2、鼠炎癥發(fā)生中的作用和機(jī)制，為炎癥性疾病發(fā)病機(jī)制及臨床診治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　[研究方法]
　　利用前期構(gòu)建的BRD7條件剔除小鼠模型，系統(tǒng)研究了BRD7剔除對(duì)小鼠炎癥發(fā)生的影響;通過(guò)全基因組基因芯片雜交，探討B(tài)RD7剔除前后小鼠重要免疫器官-脾臟差異基因表達(dá)譜，并通過(guò)real-time PCR進(jìn)行驗(yàn)證;進(jìn)一步構(gòu)建LPS誘導(dǎo)的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞炎癥模型和AOM/DSS聯(lián)合誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型，探討B(tài)RD7剔除對(duì)

3、LPS誘導(dǎo)MEF細(xì)胞及AOM/DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥發(fā)生發(fā)展的影響，并通過(guò)qRT-PCR或免疫組化技術(shù)分別在MEF細(xì)胞和小鼠結(jié)腸炎組織中對(duì)BRD7介導(dǎo)的重要炎癥因子及參與的信號(hào)通路進(jìn)行證實(shí)。
　　[結(jié)果]
　　本研究在構(gòu)建BRD7基因條件敲除小鼠模型的基礎(chǔ)上，通過(guò)外在表型的觀察，發(fā)現(xiàn)與野生型（BRD7+/+）小鼠相比BRD7-/-小鼠極易發(fā)生體表炎癥，如外生殖器炎癥、腹部膿腫及舌的乳頭狀細(xì)胞瘤，同時(shí)發(fā)現(xiàn)免疫器官-脾臟明顯增

4、大，并發(fā)生脾功能亢進(jìn)和溶血等現(xiàn)象。這些炎癥表型及相關(guān)免疫器官形態(tài)和功能的改變說(shuō)明BRD7基因剔除容易誘發(fā)小鼠炎癥的發(fā)生，降低小鼠的免疫功能。通過(guò)全基因組芯片雜交，構(gòu)建了脾臟差異基因表達(dá)譜，篩選出了差異顯著的靶基因及所涉及的信號(hào)通路，并通過(guò)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)IL-6、iNOS和CXCL1在BRD7-/-小鼠脾臟中mRNA表達(dá)水平明顯增加，TNFα明顯降低。在LPS誘導(dǎo)的BRD7-/-MEF細(xì)胞中，IL-6、iNOS和CXCL1的mRNA明顯增加，T

5、NFα的mRNA降低。AOM/DSS聯(lián)合誘導(dǎo)的慢性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型中，BRD7-/-小鼠的炎癥級(jí)別高于BRD7+/+小鼠，免疫組化結(jié)果顯示IL-6、iNOS、CXCL1和NF-κB/P65在BRD7-/-小鼠結(jié)直腸的表達(dá)也明顯高于BRD7+/+組，且NF-κB/P65入核較明顯，而TNFα在BRD7+/+小鼠結(jié)直腸組織中表達(dá)較高，其中BRD7-/-小鼠中NF-κB/P65核聚集的結(jié)果進(jìn)一步得到了免疫熒光實(shí)驗(yàn)方法的證實(shí)，說(shuō)明BRD7剔