CLOCK基因參與甲狀腺癌發(fā)生及進(jìn)展的生物學(xué)功能及分子機(jī)制研究.pdf

1、研究背景：甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，已成為國(guó)際上發(fā)病率增長(zhǎng)最快的實(shí)體瘤。臨床上用于甲狀腺癌早期篩查的指標(biāo)極為匱乏，亟待尋找新的分子標(biāo)志物。大量研究發(fā)現(xiàn)生物節(jié)律基因在大腸癌、乳腺癌等腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用。其中CLOCK、BMAL1、NPAS2三種生物節(jié)律基因的蛋白產(chǎn)物組成正性調(diào)控元件,驅(qū)動(dòng)生物節(jié)律的產(chǎn)生,并通過(guò)調(diào)控下游c-Myc、P53、P21等大量鐘控基因參與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等重要功能，但生物節(jié)律基因

2、在甲狀腺癌領(lǐng)域的研究較少。課題組前期通過(guò)免疫組化預(yù)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)甲狀腺乳頭狀癌組織中CLOCK基因表達(dá)升高。這些提示我們CLOCK基因在甲狀腺癌的發(fā)生及進(jìn)展中可能發(fā)揮重要作用，但其生物學(xué)作用及分子機(jī)制尚不清楚。
　　目的：利用CLOCK基因siRNA干涉片段，下調(diào)甲狀腺癌細(xì)胞中CLOCK基因表達(dá)水平，分析干涉后甲狀腺癌細(xì)胞的生物學(xué)功能變化。并檢測(cè)P21、P53、CyclinD1等鐘控基因的表達(dá)變化，初步探討CLOCK基因參與甲狀腺癌發(fā)

3、生及進(jìn)展的分子作用機(jī)制。
　　方法：常規(guī)培養(yǎng)甲狀腺癌細(xì)胞株BCPAP，常規(guī)培養(yǎng)。根據(jù)CLOCK基因設(shè)計(jì)特異性的siRNA，利用Lipofecter2000試劑轉(zhuǎn)染BCPAP細(xì)胞，將甲狀腺癌細(xì)胞株分為空白對(duì)照組（KD組），轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組（ZD組），單純siRNA對(duì)照組（SD），陰性對(duì)照組（YD組）和干涉組（GS組）5組。給予不同處理，利用Western Blot檢測(cè)干涉效率，CCK8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞粘附能力，流

4、式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡程度，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)評(píng)估侵襲與轉(zhuǎn)移能力。并通過(guò)Western Blot檢測(cè)P21、P53、CyclinD1等分子在干涉CLOCK基因后的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.干涉組（GS組）BCPAP細(xì)胞增殖能力較空白對(duì)照組（GD組）降低（P<0.05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無(wú)明顯改變（P>0.05）。
　　2.干涉組（GS組）BCPAP細(xì)胞凋亡較空白對(duì)照組（GD組）增多（P<0.

5、05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無(wú)明顯改變（P>0.05）。
　　3.干涉組（GS組）BCPAP細(xì)胞粘附能力較空白對(duì)照組（GD組）減低（P<0.05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無(wú)明顯改變（P>0.05）。
　　4.干涉組（GS組）BCPAP遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)較空白對(duì)照組（GD組）減少（P<0.05）。ZD組、SD組、YD組與GD組比無(wú)明顯改變（P>0.05）。
　　5.P21、P53蛋白在干涉組（GS組）