豬瘟病毒ns3蛋白致pk15細(xì)胞病變作用及轉(zhuǎn)錄靶向豬瘟病毒339;utrshrna細(xì)胞株的建立

1、Y 蛆3 3 ：4 6 ：4分類號；$ 8 5 2 ．6 5 + 1U D | C ：5 2 8 ：塑．密級。壘玨丕注蜜堡．學(xué)校代碼：1 0 7 1 2研究生學(xué)號{ ：S Y 2 0 0 4 0 2 3 5·．一 ≯ 。k 。、．學(xué)社“。專業(yè)i 差麴暖整照堂：． ．．_ _ I ≥． ^ j：?！?。 + 。研究- 方晦 筮委瘟厘堂皇魚瘞耋二。’I ¨一“。二。Lo j 研究生．．．i 箍浩二 二．：．．。 ¨

2、;‘指導(dǎo)教師 ．毯．鏖；．歸教．援一一完成時間) 墊Q 2 生量匿中國陜西楊凌C Y T O P A T H I C E F F E C T O F T H E C S F V N S 3 P R O T E I N T O P K ·1 5C E L L S A N D E S T A B L I S N Ⅱ烈T O F T 髓C E L L S T R A I N ST R A N S C R I B I N G S H

3、R N A T A R G E T T O T H E C S F V 3 ’一U T RA B S T R A C TI t h a d p r e v i o u s l y b e e n r e c o g n i z e d t h a t t h eN S 3 p r o t e i n h a si m p o r t a n t r o l e i n t h e( c y t o p a t h i e e f f e

4、 c t ) C P Ei n d u c e db yt h e C S F Va n dt h e r e i s ar e l a t i o n s h i p b e t w e e nt h ee x p r e s s i o n o f t h eN S 3 a n d t h eC P E o c c u r e d i nt h ep o r c i n ec e l ll i n e ．I t ’Sn o t o

5、n l y u s e f u lf o ru st of u r t h e r r e s e a r s ht h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h eC S F V a n d h o s tc e l lb y e x p r e s s i n gN S 3 p r o t e i ni np o r c i n e c e l l ，a n da l s ot or e v

6、e a lt h e p a t h o p o i e s i sm e c h a n i s m a b o u t C S F V ．T h e p r o l i f e r a t i o no f C S F V i n c e l li s t h eb a s et o k n o w t h ep a t h o p o i e s i sm e c h a n i s m ，5 ' - U T Ra n d

7、3 ’- U T RC a nr e g u l a t et h ed u p l i c a t i n go f t h ev i r u sg e n o ma n d e x p r e s s i o no f t h ev i r u s p o l y p r o t e i n ．S ot h er e s e a r s ho ni n h i b i t i o nt h eC S F V t Op r o l i

8、 f e r a t eb yR N A i t a r g e t e dt o t h e3 ’- U T Ri s t h eo t h e rw a y t or e v e a lt h e v i r u s ’Sp a t h o p o i e s i sm e c h a n i s m ．1 ．A c c o r d i n gt o t h eN S 3s e q u e n c e s o ft h eC S F

9、 VS h i m e ns t r a i n p u b l i s h e d ．a(chǎn)p a i ro fp r i m e r s P 1 ／P 2w h i c h 5 ’t e r m i n a lw e r e a d d e d t h e X h o Ia n d K p n l e n z y m e s i t er e s p e c t i v e l yw e r ed e s i g n e dt o g

10、o tt h eN S 3 g e n eb yR T - P C R ．A f t e rs e q u e n c i n ga n da c c r e d i t i n g t h ep r o d u c t so fP C R , t h eN S 3g e n e W a Ss u b c i o n e d t o t h e p E G P F —C 1 ，n a m e d p E G P F - N S 3a n

11、 d t h er e c o m b i n a t i o np l a s m i dp E G P F - N S 3 W a S a l s oi d e n t i f i e db y X h o Ia n d K p n I ．T h ec o n c e n t r a t i o no f t h ep E G P F - N S 3 W a S 0 ．6 r t g ／I _ t Lw h e n p u r i

12、f i e db y Q I A G E N E P l a s m i d M i n i K i t ．2 ．T h ep l a s m i dp E G F P - N S 3a n dp E G F P —C 1w e r e t r a n s f e e t e d i n t ot h e P K - 1 5 c e l l sr e s p e c t i v e l y b y L i p o f e c t a m

13、 i n e 2 0 0 0 R e g e n t a n dw e g o t t h e p o s i t i v e p E G F P - N S 3a n dp E G F P - C 1c e l l s b yo p t i m a lc o n c e n t r a t i o no f G 4 1 8 a f t e r 1 2d ．T h e N S 3 p r o t e i ne x p r e s s e

14、 di nP K - I 5 w a s i d e n t i f i e db y t h eS D S ．P A G E a n d W e s t e r n - b l o ta n d W a s a b o u t 6 8 k u ．日地C P E W a sa p p e a r e d i n p o s i t i v ep E G F P - N S 3c e l l s a t 7 2ha f t e rp a

15、s s a g e d , t h e c e l l s b e c a m er o u n dg r a d u a l l y a n d t h en u m b e r o f t h e d e t a c h e d c e l l s w e r ei n c r e a s e d ．3 ．T h ea p o p t o s i sd e t e c t i o nW a sp e r f o r m e d0 n

16、t h ep o s i t i v ep E G F P - N S 3 a n dp E G F P - C 1c e l l sa t7 2h a f t e rp a s s a g e d b y T u n e l a s s a yr e s p e c t i v e l y ．T h e r e s u l t ss u g g e s t e d t h a tt h ep o s i t i v ep E G F

17、P - N S 3 c e l l sg e n e r a t e d a p o p t o s i sa n d p r e s e n t e dC P E ．T h e r ei sa r e l a t i o n s h i pb e t w e e n t h ee x p r e s s i o n o f N S 3 a n dt h ea p o p t o s i s ．T h er a t e o f t h

18、ea p o p t o s i si n t h ep o s i t i v ep E G F P - N S 3a n d p E G F P —C 1 c e l l s w e r e 4 3 ．4 ％a n d1 3 ．1 ％p e r10 0 0 c e l l sr e s p e c t i v e l y ( P < 0 ．0 5 ) ．4 ．T h r e e p a i r s o f s i n g l