模式識(shí)別受體RIG-I識(shí)別豬瘟病毒的RNA并抑制豬瘟病毒復(fù)制的研究.pdf

1、先天免疫防御是機(jī)體抵抗病毒感染的第一道防線，維甲酸誘導(dǎo)基因1樣受體(RIG-Ⅰ likereceptors，RLRs)是識(shí)別病毒RNA的主要受體家族。目前對(duì)RLRs家族研究比較多的成員有維甲酸誘導(dǎo)型基因1（Retinoic acid-inducible geneⅠ，RIG-Ⅰ）、黑色素瘤分化相關(guān)基因5（Melanoma differentiation associated gene-5，MDA-5）及遺傳學(xué)和生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室蛋白2（Labo

2、ratory of genetics and physiology2，LGP2）。RIG-Ⅰ在病毒感染期間誘導(dǎo)IFN起到關(guān)鍵作用。豬瘟是由豬瘟病毒(CSFV)引起的一種嚴(yán)重危害全球養(yǎng)豬業(yè)的烈性動(dòng)物傳染病，其致病原CSFV為RNA病毒，開展RIG-Ⅰ樣受體識(shí)別豬瘟病毒RNA的研究，對(duì)明確該病毒感染過(guò)程中天然免疫發(fā)揮的作用機(jī)理具有重要意義。無(wú)特定病原體（Specific pathogen free，SPF）動(dòng)物是指機(jī)體內(nèi)無(wú)特定的微生物和寄生

3、蟲存在的動(dòng)物，是無(wú)傳染病的健康動(dòng)物，是目前國(guó)外使用最廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。因此用SPF動(dòng)物進(jìn)行CSFV感染實(shí)驗(yàn)，對(duì)宿主天然免疫應(yīng)答的影響更具有說(shuō)服力。
　　本研究選擇CSFV石門株感染SPF豬，動(dòng)物攻毒后研究和觀察豬只的臨床癥狀，豬只出現(xiàn)典型的CSF臨床表現(xiàn):體溫升高、食欲減退、共濟(jì)失調(diào)等;剖檢發(fā)現(xiàn)在器官中出現(xiàn)明顯的出血點(diǎn)，通過(guò)轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)，多種宿主分子mRNA的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生變化，其中，RIG-Ⅰ分子在宿主中變化較為明顯，鑒于RIG-

4、Ⅰ在天然免疫信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用，因此，我們選擇RIG-Ⅰ進(jìn)行深入研究。運(yùn)用RT-qPCR方法對(duì)宿主的RIG-Ⅰ分子進(jìn)行分析，結(jié)果表明在接種CSFV后，宿主的RIG-Ⅰ分子的表達(dá)水平呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì);在細(xì)胞水平方面，我們發(fā)現(xiàn)RIG-Ⅰ能夠識(shí)別CSFV的RNA，進(jìn)一步通過(guò)過(guò)表達(dá)RIG-Ⅰ后感染CSFV，檢測(cè)病毒基因組拷貝數(shù)及結(jié)構(gòu)蛋白E2的表達(dá)水平，證實(shí)過(guò)表達(dá)RIG-Ⅰ分子可以抑制CSFV的復(fù)制，反之，應(yīng)用siRNA敲低PK-15細(xì)