抗菌藥敏試驗的意義

1、藥敏試驗的意義：1.查出耐藥，減少治療錯誤，便于醫(yī)生選擇個體化療方案、節(jié)省費用。2.進行耐藥監(jiān)測，為醫(yī)院感染控制部門提供防治依據(jù)，為經(jīng)驗用藥提供可靠依據(jù)。3.利用耐藥監(jiān)測結(jié)果控制抗菌藥物應(yīng)用，減少耐藥菌株的出現(xiàn)，延長新藥使用壽命。4.為新藥的研究和評估提供有價值的信息。（二）、藥物敏感試驗規(guī)則目前世界上通用的規(guī)則是德國和歐洲標(biāo)準(zhǔn)，而我國主要以臨床試驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（CLSI），即美國國家實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會(NCCLS)的規(guī)則為標(biāo)準(zhǔn)，這個標(biāo)

2、準(zhǔn)主要包括CLSI紙片擴散法（M2）和需氧菌稀釋法（M7）。（三）、抗菌藥物敏感性試驗結(jié)果參照標(biāo)準(zhǔn)1.標(biāo)準(zhǔn)的正確使用M100–即新表M100S17，每年更新1次；包括M2和M7文件，M2–即紙片擴散法(DD)文件M2A9，M7–即MIC文件M7A7。M2、M7文件每3年更新一次；使用文件時應(yīng)注意文件是否已更新，避免使用舊文件造成判斷結(jié)果失誤。2.獲得文件的方法如果購買廠家的紙片可向廠家索取標(biāo)準(zhǔn)，每年國際化會議也會頒發(fā)此文件的中心內(nèi)容。（

3、四）、CLSIM100表內(nèi)容：CLSIM100表主要包括版本中的更新要點、各版本抗菌藥物分組、M2紙片擴散法用的表、M7MIC用的表、M7MIC用的表及詞匯表等內(nèi)容。2007年主要更新內(nèi)容有關(guān)“或”的章節(jié)，即同類抗生素能否相互替代的問題；耐藥性的增長及連續(xù)發(fā)生株的測試原則；不適于尿中分離菌的藥物，大環(huán)內(nèi)酯類的說明；革蘭陰性菌及陽性菌的更新部分；質(zhì)量評估和質(zhì)量控制方面的更新。（五）、試驗與報告中抗菌藥物的選擇M100表將抗菌藥物分成A.B

4、.C.U.O組1、表1和表1A中所列A組藥物被認為對特定菌群的常規(guī)的首選試驗組合以及常規(guī)結(jié)果報告中應(yīng)該出現(xiàn)的藥物。2、B組包含一些臨床上重要的，特別是針對醫(yī)院內(nèi)感染的藥物，也可以用于首選試驗。但是，它們只是被選擇性地報告，例如當(dāng)細菌對A組同類藥物耐藥時，可以選用。其他報告指征可包括以下幾點：特定的標(biāo)本來源(如對腦脊液中的腸道桿菌用三代頭孢菌素或者對泌尿道的分離菌株用TMPSMZ)；多種細菌感染；多部位感染；對A組藥物過敏、耐受或無效的病

5、例；為流行病學(xué)調(diào)查目的向感染控制組報告。3、C組包括替代性或補充性抗菌藥物，可在以下情況進行試驗：某些單位隱匿局部或廣泛流行的對數(shù)種基本藥物耐藥的菌株；治療對基本藥物過敏的患者；治療少見菌的感染(如氯霉素對沙門菌屬或某些假單胞菌屬)；為流行病學(xué)目的向感染控制組報告。4、U組(“泌尿道”)列出了某些僅用于治療泌尿道感染的抗微生物藥(如呋喃妥因和某些喹諾酮類藥物)。除泌尿道，其它感染部位分離的病原菌不用此組藥物進行試驗。5、O組(“其它”)

6、對該組細菌有臨床適應(yīng)癥但一般不允許常規(guī)試驗與報告的藥物。6、Inv組(“研究性”)對該菌群作研究用且尚未經(jīng)FDA批準(zhǔn)的藥物。（六）、試驗操作的基本原則1.臨床標(biāo)本不能直接做藥敏試驗，目的以準(zhǔn)確結(jié)果回報臨床。2.不應(yīng)在同一平板做混合菌藥敏試驗。3.與感染無關(guān)菌株（定植菌）不做藥敏試驗。4.判斷標(biāo)準(zhǔn)：一菌一藥一規(guī)則。二、方法分類簡介及標(biāo)準(zhǔn)化操作流程藥敏試驗分為以下實驗方法：紙片擴散法、Etest法、瓊脂對倍稀釋法、肉湯對倍稀釋法、儀器法。（

7、一）紙片擴散法主要介紹內(nèi)容包括：紙片擴散法的原理、培養(yǎng)基的制備、接種物的制備及接種、貼藥敏紙片、孵育與判讀。1、KB法原理：將干燥的浸有一定濃度抗菌藥物的濾紙片放在已接種一定量某種細菌ENTEROCOCCI。紙片順序可做調(diào)整，如：測定E.coli和Klebsiellapneumoniae時CAZ、CTX紙片貼在含酶抑制劑的紙片如AMC旁邊，初步提示是否產(chǎn)ESBLs。2.在接種好的瓊脂平板上貼加紙片注意要點將事先確定的抗微生物藥組合的紙片

8、分貼到接種好菌的瓊脂平板表面。每個紙片應(yīng)與瓊脂表面完全接觸，并且應(yīng)均勻分布，使其中心間距不小于24mm貼完紙片后，應(yīng)在15分鐘內(nèi)，將平板反轉(zhuǎn)過來，置于35℃孵箱中。注意事項：1.150mm平板所貼紙片不應(yīng)超過12個，100mm的不應(yīng)超過5個，嗜血桿菌要求150mm平板貼紙片不應(yīng)超過9張，100mm平皿貼紙片不應(yīng)超過4張。2.紙片一但接觸了瓊脂表面，就不應(yīng)再挪動位置。3.除嗜血桿菌，淋球菌、鏈球菌、腦膜炎奈瑟氏外，平板不應(yīng)在CO2含量高的

9、空氣中孵育，因為其解釋結(jié)果是根據(jù)普通空氣中的孵育結(jié)果研究出的，而CO2會顯著改變某些藥物的抑菌圈大小。5、判讀平板和解釋結(jié)果孵育1618小時后，檢查每一塊平板，如果平板劃線滿意，接種物準(zhǔn)確無誤，抑菌圈應(yīng)為正圓形，菌落應(yīng)相互融和生長。則可以開始記錄抑菌環(huán)大小。如果出現(xiàn)明顯的單個菌落，說明接種量太少，必須重復(fù)試驗。注意：葡萄球菌或腸球菌應(yīng)在投射光的照射下判讀，變形桿菌屬會攀延生長，應(yīng)讀大的抑菌環(huán)。下圖所示為理想的試驗結(jié)果。6、測量工具游標(biāo)卡

10、尺與普通直尺圖中所示為經(jīng)常用到的測量工具，注意用直尺測量時應(yīng)通過紙片的中心，同時盡量貼近平皿；游標(biāo)卡尺只需讀到mm，測量時也應(yīng)盡量貼近平皿。7、KB試驗中常見的錯誤來源KB試驗中常見的錯誤來源有抄錄數(shù)據(jù)時的書寫錯誤，測量抑菌圈直徑的讀數(shù)錯誤，菌株有污染，錯誤的孵育溫度或空氣條件，試驗用培養(yǎng)基的質(zhì)量不合格，尤其厚度，紙片在試驗室取用或貯存的過程中失效，接種菌懸液太濃或太淡，判讀標(biāo)準(zhǔn)錯誤。(二)Etest試驗1.原理：E試驗(Etest)是