捻轉(zhuǎn)血矛線蟲體外培養(yǎng)條件優(yōu)化和H11蛋白提取及氨肽酶活性分析.pdf

1、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchuscontortus）是牛羊等反芻動(dòng)物的一種重要消化道寄生蟲。目前，藥物防治是控制該病的主要方法，但藥物殘留、環(huán)境污染、抗藥性蟲株的出現(xiàn)和蔓延，使得傳統(tǒng)的治療受到嚴(yán)重挑戰(zhàn)，迫切需要一種有效的防治方法以控制其感染和流行。
　　 捻轉(zhuǎn)血矛線蟲H11蛋白是一種分子量在110ku的完整膜糖蛋白復(fù)合物，可引起與血清抗體有關(guān)的高水平的保護(hù)作用。天然H11免疫動(dòng)物后，可使雄蟲減少70％、雌蟲減少80％、蟲卵減少

2、90％，且對(duì)不同年齡階段的綿羊均具有保護(hù)作用，且其保護(hù)率與抗體水平也呈正相關(guān)。但是由于原核系統(tǒng)對(duì)表達(dá)產(chǎn)物的翻譯后加工、修飾、糖基化等作用不能達(dá)到真核系統(tǒng)的要求，其重組形式僅能提供很小的免疫保護(hù)，免疫效果遠(yuǎn)不及天然抗原。
　　 目前獲取H11所需的成蟲是從自然感染羊的皺胃里采得，成本高且操作復(fù)雜，受季節(jié)性及羊自身感染程度等因素的限制，往往混雜其他線蟲，具有純度和數(shù)量的不確定性，不適合于長(zhǎng)期研究，不能適應(yīng)科研的大量需要。急切需要找到

3、一種利用體外培養(yǎng)來(lái)大量獲得蟲體的方法。本研究探索了溫度、pH值、培養(yǎng)基等因素在離體培養(yǎng)中的作用及相互關(guān)系，優(yōu)化了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲離體培養(yǎng)體系。對(duì)培養(yǎng)的L4期幼蟲和自然感染的成蟲的H11天然蛋白分別進(jìn)行了提取和純化，并進(jìn)行了氨基肽酶活性分析。為利用體外培養(yǎng)獲取捻轉(zhuǎn)血矛線蟲H11天然抗原和制備天然抗原疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。
　　 1.相同條件下，在一定的溫度范圍內(nèi)，蟲卵的孵化率及孵化速度與溫度成正比，蟲卵的最適發(fā)育溫度為34℃，孵化率高達(dá)

4、97％。
　　 2.相同條件下，NCTC135、NCTC109、和M199培養(yǎng)系中的L3可發(fā)育至L4晚期，F(xiàn)12中L4只發(fā)育至早四期，四種培養(yǎng)系中L3發(fā)育至L4的蟲體數(shù)占存活蟲體數(shù)的比例以NCTC135中的最高，達(dá)99％。
　　 3.pH5.8-6.2時(shí)，L3發(fā)育至L4速度慢，發(fā)育率不到50％；pH6-5.6.7時(shí)，L3發(fā)育至L4的程度及發(fā)育率明顯提高，以pH6.7為最佳。
　　 4.成功提取并純化了L4期幼蟲及