桃再生體系的優(yōu)化與反義PG基因遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、桃（Prunus persical（L.）Batsch）是世界性重要果樹，我國是桃主產(chǎn)國，產(chǎn)量居世界之首，甘肅省是桃的原產(chǎn)地和最適栽培區(qū)之一。桃是典型的呼吸躍變型果實(shí)，成熟果實(shí)采后很快出現(xiàn)呼吸高峰，果肉迅速變軟，給貯藏運(yùn)輸帶來極大不便，這是長期制約桃生產(chǎn)的主要問題之一。而通常采用的低溫冷藏等方法易造成桃果冷害，結(jié)果十分不理想。因此，通過植物基因工程技術(shù)控制果實(shí)軟化，選育出耐貯運(yùn)的桃新品種是從根本上解決桃貯運(yùn)難題的有效途徑之一。本研究通過

2、反義基因技術(shù)特異性抑制果實(shí)成熟后PG的表達(dá)，有望延遲桃果實(shí)的軟化，獲得耐貯性硬溶質(zhì)桃新種質(zhì)。本研究以甘肅省常栽品種白粉桃為試材，建立了桃遺傳轉(zhuǎn)化再生體系，并以白粉桃莖段為材料，在優(yōu)化桃遺傳轉(zhuǎn)化再生體系的基礎(chǔ)上，通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)反義PG基因轉(zhuǎn)化，得到了轉(zhuǎn)化植株并用PCR進(jìn)行了檢測。研究主要取得如下結(jié)果：
　　 ⑴以白粉桃幼莖和花后不同時(shí)間成熟的果實(shí)種胚為外植體，進(jìn)行桃遺傳轉(zhuǎn)化再生體系優(yōu)化。其幼莖最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA1.

3、0mg/L+NAA0.5mg/L，誘導(dǎo)率可達(dá)93.5％。開花75d后的種胚能在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L上直接誘導(dǎo)分化成苗，誘導(dǎo)分化率可達(dá)91.5％。將不定芽用100mg/L IBA浸蘸其基部轉(zhuǎn)移到不含激素的1/2MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，生根率達(dá)到78％。
　　 ⑵用攜帶有多聚半乳糖醛酸酶（PG）基因反義片段和35S啟動(dòng)子的表達(dá)載體pCAMBIA2300，轉(zhuǎn)化白粉桃莖段。受體材料預(yù)培養(yǎng)3d后，經(jīng)根癌農(nóng)桿菌