毛桃離體再生體系優(yōu)化及遺傳轉(zhuǎn)化初探.pdf

1、為了給桃砧木毛桃(Prunuspersica)轉(zhuǎn)基因研究提供穩(wěn)定、高效的離體再生體系，本試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上，以繼代保存的毛桃無(wú)菌試管苗的葉片為外植體，通過(guò)研究不同濃度硫代硫酸銀，腺嘌呤、玉米素等一系列因素對(duì)毛桃葉片再生的影響，期望能較大程度的提高毛桃離體葉片的再生率，滿足毛桃遺傳轉(zhuǎn)化的需求。同時(shí)以由毛桃葉片誘導(dǎo)出的愈傷組織為試材，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)毛桃愈傷組織的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了初步探索，期望能在篩選培養(yǎng)基上獲得抗性愈傷組織，初步

2、建立毛桃愈傷組織遺傳轉(zhuǎn)化體系。主要研究結(jié)果如下:
　　1.適宜毛桃試管苗繼代保存的培養(yǎng)基為L(zhǎng)P基本培養(yǎng)基+CPPU0.05mg/L+IBA0.3mg/L+Ad3.0mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.8g/L，pH為5.85-6.00，每隔28d左右繼代一次。
　　2.毛桃離體葉片及葉柄在LP基本培養(yǎng)基+CPPU0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.0g/L的基礎(chǔ)上(pH=5.85-6.00)，

3、添加生物素、核黃素、泛酸鈣不能誘導(dǎo)離體葉片及葉柄不定芽再生;添加60μMSTS，離體葉片及葉柄再生率分別為15.00％和4.00％;以1.5mg/LZT+0.3mg/LNAA代替0.5mg/LCPPU+0.1mg/LNAA時(shí)，離體葉片再生率為8.89％;添加3.0mg/LAd，離體葉片再生率最高達(dá)到18.33％;
　　3.適宜毛桃莖尖生長(zhǎng)的預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基為L(zhǎng)P基本培養(yǎng)基+CPPU0.01mg/L+IBA0.3mg/L+Ad3.0mg

4、/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.0g/L，pH為5.85-6.00，暗培養(yǎng)21d后轉(zhuǎn)移至光下培養(yǎng)21d。
　　4.毛桃預(yù)培養(yǎng)葉片在LP基本培養(yǎng)基+CPPU0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.0g/L培養(yǎng)時(shí)(pH=5.85-6.00)，再生率為4.44％，再加入2.0mg/LAd，再生率提高至4.92％。
　　5.AP基本培養(yǎng)基對(duì)毛桃離體葉片愈傷組織誘導(dǎo)及再生的效果不如LP基本培養(yǎng)基;毛桃愈傷組

5、織繼代保存時(shí)需加入一定的激素，否則會(huì)出現(xiàn)增殖倍數(shù)下降，生長(zhǎng)狀態(tài)差的現(xiàn)象;毛桃愈傷組織在LP基本培養(yǎng)基+CPPU0.5mg/L+IBA/NAA0.1mg/L+蔗糖30.0g/L上懸浮培養(yǎng)，無(wú)再生現(xiàn)象。
　　6.毛桃試管苗較適宜的生根培養(yǎng)基為1/2LP基本培養(yǎng)基+IBA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+PG40mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.8g/L，pH為5.85-6.00，培養(yǎng)42d后生根率可達(dá)79.23％，平均生根數(shù)為