磨盤(pán)柿離體再生體系的建立與遺傳轉(zhuǎn)化的初步探索.pdf

1、磨盤(pán)柿是河北省的名優(yōu)特產(chǎn)，果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富并具藥用價(jià)值，但是柿果采期集中，易軟化，產(chǎn)地交通不便，爛耗損失嚴(yán)重，大大降低了柿果的商品率。目前柿果的貯藏仍以一些傳統(tǒng)的方法，如室內(nèi)堆藏、露天架藏、自然冷凍貯藏為主，很難使柿子長(zhǎng)期保持較大的硬度，影響柿果貯藏保鮮期及銷(xiāo)售期，利用轉(zhuǎn)基因方法定向改良柿的性狀，則能從根本上解決柿果問(wèn)題。 本論文針對(duì)磨盤(pán)柿的貯藏方面的問(wèn)題，研究了磨盤(pán)柿的高頻離體再生體系，初步建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的ACC合成酶基因遺傳轉(zhuǎn)

2、化體系，從而為磨盤(pán)柿的培育、改良和快速推廣提供物質(zhì)與技術(shù)支持。主要結(jié)果如下： 1建立了磨盤(pán)柿葉片再生體系。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，葉片再生的最佳途徑是采用二次誘導(dǎo)法。首先取繼代培養(yǎng)25～30左右無(wú)菌苗的葉片，接在1/2DKW+TDZ0.5mg/L+ZT1.0mg/L中暗培養(yǎng)7天后，在光照條件下誘導(dǎo)愈傷組織和不定芽的形成。30天后接種于1/2DKW+ZT2.0mg/L中分化培養(yǎng)30天，不定芽再生率為86﹪，平均不定芽數(shù)為3.7。

3、2建立了磨盤(pán)柿生根體系。比較直接添加激素法和浸蘸兩種方法生根效果。直接添加激素法，比較了不同濃度的IAA、IBA以及基礎(chǔ)培養(yǎng)基和暗培養(yǎng)時(shí)間，對(duì)磨盤(pán)柿生根的影響，試驗(yàn)表明在1/2MS(1/2N)要優(yōu)于MS(1/2N)和1/2MS；IAA的效果要好與IBA，1.0mg/L的IAA為最適濃度；適宜的暗培養(yǎng)時(shí)間為5天。生根率為93.5﹪，平均根條數(shù)為4.7。IAA的浸蘸效果要好于IBA，最佳的浸蘸方案為250mg/L的IAA浸蘸15～20min

4、。生根率為75﹪，平均根條數(shù)1.8。 3初步建立了磨盤(pán)柿的基因的遺傳轉(zhuǎn)化體系。對(duì)轉(zhuǎn)化方法和轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了初步的研究。以磨盤(pán)柿的葉片作為外植體，培養(yǎng)兩天后，用加入50mg/L的AS的OD550=1.0左右的菌液浸染葉片15min后，共培養(yǎng)3天后轉(zhuǎn)到MS(1/2N)篩選培養(yǎng)基上篩選培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中選用頭孢200mg/L抑制濃桿菌的繁殖，壯觀霉素50mg/L作為篩選濃度。對(duì)部分轉(zhuǎn)基因的再生苗，進(jìn)行了PCR檢測(cè)，初步確定2株的目的基因