茶樹離體增殖與再生體系的建立.pdf

1、本文以無(wú)性系品種茶樹龍井-43腋芽為外植體,采用附加不同種類激素的MS培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行組織培養(yǎng),系統(tǒng)地研究了腋芽離體培養(yǎng)的技術(shù)體系,初步探討了影響腋芽培養(yǎng)的各種因素,初步建立了茶樹離體增殖和再生體系。論文取得如下結(jié)果:
　　 (1)初代培養(yǎng)
　　 腋芽初代培養(yǎng)采用1/2MS為基本培養(yǎng)基,附加BA8.88μmol·L-1+IBA0.49μmol·L-1IBA+GA38.66μmol·L-1+蔗糖30g·L-1+瓊脂7.0g·

2、L-1。春季材料的外植體污染率、褐變率比秋季的低,腋芽萌發(fā)率比秋季的高;外植體留部分葉柄、接種前用2.0g·L-1PVP溶液浸泡30min、接種后在8℃下避光培養(yǎng)16h可以有效降低外植體褐化率。春季材料、合適的外植體類型、培養(yǎng)溫度及抗氧化劑的技術(shù)組合,有助于提高茶樹腋芽初代培養(yǎng)的成功率。
　　 (2)繼代培養(yǎng)
　　 龍井-43的最佳增殖條件是以1/2MS為基本培養(yǎng)基,添加0.05μmol·L-1或0.1μmol·L-1的

3、TDZ,配合使用0.25或0.49μmol·L-1IBA,增殖倍數(shù)可以達(dá)到2.0以上。茶苗增殖倍數(shù)隨著TDZ濃度的升高而降低,在含有TDZ的培養(yǎng)基中連續(xù)繼代也不利于茶苗的增殖與伸長(zhǎng),茶苗在不添加任何植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑培養(yǎng)基中能夠良好地伸育。
　　 (3)愈傷組織的誘導(dǎo)與再生
　　 從茶樹組培苗上取葉片與莖段接種于的1/2MS培養(yǎng)基上,植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)荊為TDZ0.1、0.5、1.0μmol·L-1與0、0.49、0.98、1.9

4、7μmol·L-1IBA的全組合。當(dāng)TDZ0.1μmol·L-+0.49μmol·L-1時(shí),對(duì)離體莖段和葉片愈傷組織的誘導(dǎo)效果最好,愈傷組織誘導(dǎo)率可達(dá)100％;單獨(dú)使用0.1μmol·L-1TDZ也可誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織,但效果不及TDZ和IBA配合使用的效果,說(shuō)明TDZ附加適量的IBA有利于愈傷組織的形成。當(dāng)TDZ濃度大于0.5μmol·L-1時(shí),不論是否添加IBA,離體莖段和葉片均未誘導(dǎo)出愈傷組織。以茶苗為外植體時(shí),在所有的處理上,均可

5、以從茶苗基部誘導(dǎo)出愈傷組織。
　　 莖段和葉片在TDZ0.1μmol·L-1+0.49μmol·L-1IBA培養(yǎng)基上誘導(dǎo)的愈傷組織在相同培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)一次繼代培養(yǎng),取出愈傷組織轉(zhuǎn)至新鮮的不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比的器官分化培養(yǎng)基上,培養(yǎng)不同時(shí)間。離體莖段與葉片誘導(dǎo)出的愈傷組織在所有培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)不同時(shí)間的培養(yǎng)均沒(méi)有產(chǎn)生不定芽。來(lái)源于茶苗基部的愈傷組織在BA8.88
　　 μmol·L-1+IBA0.49μmol·L-1培養(yǎng)12周

6、,愈傷組織再生率分別為52.6％。在不同的時(shí)間重復(fù)了4次,其再生率分別為67.4％、53.6％、45.3％、49.6％。說(shuō)明茶苗莖段誘導(dǎo)出的愈傷組織的再生技術(shù)具有穩(wěn)定性。
　　 較小的再生芽不宣從愈傷組織上剪下單獨(dú)培養(yǎng),再生芽與愈傷組織一起培養(yǎng)有利于其成苗與生長(zhǎng),在1/2MS+BA8.88,umol·L-1+IBA0.49μmol·L-1培養(yǎng)基上培養(yǎng)6周,成苗率可以達(dá)到64.3％,且生長(zhǎng)狀況較好,葉片正常展開,葉綠苗壯。

7、　　 (4)茶苗的生根與移栽
　　 使用2450μmol·L-1IBA浸泡茶苗基部5min,誘導(dǎo)生根效果明顯。誘導(dǎo)2周后就開始有茶苗生根,第6周生根率達(dá)到70.8％,茶苗平均根數(shù)3.8條,有44.6％的根長(zhǎng)度大于1.5cm,茶苗基部無(wú)愈傷組織,根直接從莖上長(zhǎng)出,有根毛。
　　 打開瓶蓋,生根茶苗在室內(nèi)進(jìn)行煉苗7d。經(jīng)煉苗后用鑷子輕輕將茶苗取出,用自來(lái)水洗掉根部培養(yǎng)基,移栽至滅菌的基質(zhì)中(營(yíng)養(yǎng)土:蛭石=1∶1),移栽后3