梨品種及砧木離體葉片再生體系建立的研究.pdf

1、本研究以?xún)?yōu)良梨栽培品種喜水和秦豐以及西洋梨矮化砧木BA29試管苗為試材，對(duì)影響葉片離體再生不定芽的因素如基因型、基本培養(yǎng)基成分、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類(lèi)及濃度配比、接種材料類(lèi)型、接種方式以及培養(yǎng)條件等進(jìn)行了系統(tǒng)研究，成功建立了喜水梨、秦豐梨和西洋梨矮化砧木BA29的離體葉片再生體系。 主要研究結(jié)果如下: 1.影響梨品種及砧木離體葉片再生的內(nèi)在因素: (1)基因型是影響梨及砧木離體葉片再生的重要因素。 (2)離體再生

2、能力葉片高于節(jié)間嫩梢和葉柄；再生效果整個(gè)葉片優(yōu)于葉塊；喜水梨和BA29以試管苗頂端幼嫩葉片為適宜外植體，秦豐梨適宜使用頂端幼嫩葉片或中部葉片誘導(dǎo)再生。 (3)繼代次數(shù)對(duì)試管苗葉片再生能力有很大影響。喜水梨和秦豐梨15代左右的試管苗葉片再生能力強(qiáng)，矮化砧木BA29的8～15代試管苗葉片再生能力強(qiáng)。 2.影響梨品種及砧木離體葉片再生的外部因素: (1)培養(yǎng)基:NN69培養(yǎng)基為喜水梨再生培養(yǎng)基；秦豐梨對(duì)基本培養(yǎng)基的差異

3、反應(yīng)不敏感；BA29適宜應(yīng)用MS或NN69培養(yǎng)基誘導(dǎo)再生。 (2)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑:喜水梨宜采用 TDZ1.5mg/L+IAA(0.1～0.5)mg/L或IBA(0.1～0.5)mg/L；秦豐梨宜采用6-BA5.0mg/L+IBA0.3mg/L;BA29宜采用TDZ1.5mg/L+NAA 0.3mg/L。 (3)接種前宜采用對(duì)葉片垂直主脈均勻切割三次的處理方式。秦豐梨和BA29宜采用遠(yuǎn)軸面接觸培養(yǎng)基接種；喜水梨葉片再生誘導(dǎo)對(duì)接

4、種方向不敏感。 (4)暗培養(yǎng)時(shí)間對(duì)葉片再生不定芽有影響:秦豐梨和BA29適宜經(jīng)暗培養(yǎng)2～3周；喜水梨經(jīng)1～3周暗培養(yǎng)與對(duì)照沒(méi)有顯著性差異，4～5周暗培養(yǎng)對(duì)再生不定芽不利。 (5)適當(dāng)提高NN69培養(yǎng)基中NO3-N的比例可顯著提高BA29葉片再生的效率。最適NH4+-N與NO3--N比例為1:5，再生率可達(dá)100％。 (6)AgNO3使不定芽發(fā)生高峰提前、不定芽再生效率提高，以1～2mg/L最適宜；胰蛋白胨可促進(jìn)葉

5、片再生，最佳使用濃度為800～1200mg/L。蛋白胨不能促進(jìn)BA29葉片再生，且當(dāng)濃度為800 mg/L會(huì)抑制其再生。 3.再生植株的繼代培養(yǎng):將長(zhǎng)有不定芽的部分葉片適時(shí)轉(zhuǎn)移至繼代培養(yǎng)基對(duì)不定芽的伸長(zhǎng)有利。 喜水和砧木BA29再生植株的增殖培養(yǎng)基以MS+6-BA 0.5mg/L+IBA0.1mg/L適宜；秦豐梨再生植株增殖的培養(yǎng)基為AS+6-BA0.8mg/L+IBA 0.1mg/L。 用牛皮紙與封口膜作為封口

6、材料最佳，經(jīng)濟(jì)方便，再生植株生長(zhǎng)良好，且接種間隔時(shí)間適宜。 4.再生植株的生根培養(yǎng):喜水梨再生植株的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+AC0.5mg/L，培養(yǎng)5d后轉(zhuǎn)入不含生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中；適宜秦豐梨再生植株生根的培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA1.0mg/L，培養(yǎng)5～10d后轉(zhuǎn)入不含生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中。 5.抗生素敏感性:BA29葉盤(pán)法基因轉(zhuǎn)化中抑制農(nóng)桿菌生長(zhǎng)的抗生素選用