麗格海棠遺傳轉(zhuǎn)化及離體誘變體系的研究.pdf

1、麗格海棠(Rieger Begonia)，又稱玫瑰海棠，屬秋海棠科秋海棠屬的多年生草本花卉。因其花色艷美、花型多樣、花朵碩大、花期特長，尤其是在春節(jié)開花，深受市場的歡迎。目前，最好的麗格海棠盆花仍以進(jìn)口為主，但由于麗格海棠不耐運(yùn)輸，長時(shí)間運(yùn)輸不僅使麗格海棠折斷受損情況普遍發(fā)生，而且對葉片的形狀、花的形態(tài)也會造成很大的影響，導(dǎo)致觀賞效果的嚴(yán)重下降；同時(shí)，麗格海棠存在生長周期長，抗病性差和栽培難度大等缺點(diǎn)，因此，在國內(nèi)對麗格海棠進(jìn)行品種的遺

2、傳改良，加強(qiáng)其繁殖和栽培技術(shù)的研究已迫在眉睫。 本研究以麗格海棠葉片和葉柄為外植體，通過對不同激素濃度的篩選，構(gòu)建了麗格海棠的受體再生系統(tǒng)，在此基礎(chǔ)上，初步建立了麗格海棠的遺傳轉(zhuǎn)化體系和EMS離體誘變體系，為麗格海棠品種改良奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下： 1、優(yōu)化了麗格海棠的高效再生體系，為后期的遺傳轉(zhuǎn)化、離體誘變奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。它們分別是：MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.05mg/L+KT0.1mg/+蔗糖3

3、％+瓊脂0.7％pH6.0(最適生芽培養(yǎng)基)，其生芽率為95％，且平均有效芽數(shù)高達(dá)17.87；1/2MS+IBA0.2mg/L+NAA0.15mg/L+蔗糖3％+瓊脂0.7％pH6.0(最適生根培養(yǎng)基)，生根率為100％，且小苗生長壯實(shí)。 2、研究了麗格海棠外植體對抗生素的敏感性。試驗(yàn)結(jié)果表明： Km=100mg/L能完全抑制麗格海棠葉片外植體的再生，而半抑制劑量則為Km=25～50 mg/L；當(dāng)Cef>250 mg/L時(shí)，其對

4、麗格海棠葉片外植體的再生有一定的影響。 3、初步構(gòu)建了麗格海棠的遺傳轉(zhuǎn)化體系。利用根癌農(nóng)桿菌EHA52將目的基因eyed2轉(zhuǎn)入麗格海棠受體中，T<,0>代愈傷組織的PCR和Southem雜交分析證明eyed2基因己整合到麗格海棠基因組中。 4、建立了麗格海棠EMS離體誘變技術(shù)體系。本試驗(yàn)研究了EMS的處理時(shí)間、處理濃度和處理溫度對麗格海棠葉片外植體離體再生的影響，結(jié)果表明：EMS=0.4％(8h,20℃)為麗格海棠葉片外

5、植體再生的半抑制劑量，該濃度適合誘變處理。 5、獲得了不同類型的變異植株。通過EMS對麗格海棠進(jìn)行離體誘變，在M<,0>代中篩選出21株在形態(tài)上表現(xiàn)出變異的植株，通過對這些變異植株的RAPD分析，有12株的電泳條帶表現(xiàn)出多態(tài)性，進(jìn)一步證明這些變異是發(fā)生在分子水平上的。 6、探討了變異的遺傳穩(wěn)定性及嵌合變異體的分離，對12個(gè)在基因組上表現(xiàn)出變異的植株進(jìn)行離體培養(yǎng)，在M<,2>代分離出嵌合體變異，并鑒定出有7個(gè)變異是可以遺傳