三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1在Ⅱ型糖尿病患者單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞介導(dǎo)膽固醇外流的研究.pdf

1、研究背景：動脈粥樣硬化是一種動脈局部脂質(zhì)沉積及慢性炎癥改變的疾病，病變的形成與血脂代謝紊亂以及與其密切相關(guān)的炎癥反應(yīng)有直接的聯(lián)系，Ⅱ型糖尿病患者是動脈粥樣硬化的高危人群，具有發(fā)病早、病變范圍廣泛和程度嚴(yán)重的特點。糖尿病患者的血脂紊亂在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要作用，其特點為高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)降低、甘油三酯(TG)升高和小而致密的低密度脂蛋白增加。研究表明血漿HDL-C水平與糖尿病患者動脈粥樣硬化的病變程度呈負(fù)相

2、關(guān)，因而推測膽固醇逆轉(zhuǎn)運系統(tǒng)功能的改變在動脈粥樣硬化病變的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。但目前在此方面的研究相對缺乏，對糖尿病患者體內(nèi)在動脈粥樣硬化斑塊形成中的主要細(xì)胞——巨噬細(xì)胞的功能改變，以及膽固醇在細(xì)胞內(nèi)外的轉(zhuǎn)運情況了解甚少。 研究目的：1.通過體外培養(yǎng)的人外周血單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞以及誘導(dǎo)的泡沫細(xì)胞，研究Ⅱ型糖尿病合并動脈粥樣硬化的患者(Ⅰ組)三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCAl)介導(dǎo)的膽固醇外流，并與非糖尿病的動脈粥樣硬

3、化患者(Ⅱ組)和非動脈硬化癥患者(Ⅲ組)進行比較，旨在了解糖尿病患者ABCAl介導(dǎo)的膽固醇外流的特點。 2.通過對體外培養(yǎng)的人外周血單核細(xì)胞來源并經(jīng)過誘導(dǎo)后的泡沫細(xì)胞進行阿托伐他汀鈣、非諾貝特酸、普羅布考三種藥物的分別干預(yù)，探討三種藥物在Ⅱ型糖尿病合并動脈粥樣硬化患者、非糖尿病的動脈粥樣硬化患者和非動脈硬化癥患者對其ABCA-l介導(dǎo)的膽固醇外流的影響。 研究方法：1.選擇糖尿病外周動脈粥樣硬化患者、非糖尿病外周動脈粥樣硬

4、化患者和非動脈硬化癥患者。體外用自體血漿培養(yǎng)人外周血單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞。經(jīng)由乙酰化低密度脂蛋白(Acl-LDL)的刺激充分誘導(dǎo)轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞。 2.用細(xì)胞ELISA檢測三組患者巨噬細(xì)胞過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)和ABCA-1的表達(dá)，以及經(jīng)Acl-LDL刺激誘導(dǎo)后，泡沫細(xì)胞PPARα和ABCA-1表達(dá)的變化。 3.用高效液相色譜檢測細(xì)胞內(nèi)膽固醇，并計算細(xì)胞內(nèi)膽固醇的外流率。 4.分別采用阿托伐他

5、汀鈣、非諾貝特酸、普羅布考加入三組患者巨噬細(xì)胞培養(yǎng)體系，觀察對Acl-LDL吞噬能力、細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流率的影響。 結(jié)果：1.成功培養(yǎng)出人外周血單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞，并能充分誘導(dǎo)為泡沫細(xì)胞，經(jīng)單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)特異標(biāo)志CD68免疫組化染色鑒定為巨噬細(xì)胞，并經(jīng)油紅染色鑒定為吞噬大量脂質(zhì)的泡沫細(xì)胞。 2.鏡下觀察，Ⅱ型糖尿病合并動脈粥樣硬化組的單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞含脂質(zhì)較多，在未用Acl-LDL誘導(dǎo)前已有較其他兩組細(xì)胞

6、更多的轉(zhuǎn)變?yōu)楹罅恐|(zhì)的泡沫細(xì)胞。 3.自體血漿培養(yǎng)下三組患者的巨噬細(xì)胞PPARα和ABCAl表達(dá)沒有顯著區(qū)別。 4.自體血漿加入Acl-LDL培養(yǎng)后，三組患者的泡沫細(xì)胞PPARα和ABCAl的表達(dá)均顯著降低(P均＜0.05)，Ⅰ組下降的程度最為明顯，與Ⅲ組比較，組間有顯著差異(P＜0.05)。 5.自體血漿培養(yǎng)與自體血漿加入Acl-LDL培養(yǎng)后細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TC)的變化率(加入Acl-LDL前后TC差值/加入

7、Acl-LDL前TC)，顯示Ⅱ組(730.76±15.60％)＞Ⅰ組(674.87±53.17％)＞Ⅲ組(649.58±51.71％)的趨勢，其中Ⅱ、Ⅲ組間有顯著差異(P＜0.05)；細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯(CE)變化率在Ⅰ組(1979.74±314.27％)顯著高于Ⅱ組(570.64±16.72％)和Ⅲ組(452.94±40.26％)(P均＜0.05)，Ⅱ組與Ⅲ組之間無顯著區(qū)別(P＞0.05)。 6.鏡下可見阿托伐他汀鈣、非諾貝特酸和

8、普羅布考對Acl-LDL引起的巨噬細(xì)胞損傷均有保護作用，其中阿托伐他汀鈣的保護效果最好、起效最快。三種藥物治療均能顯著抑制巨噬細(xì)胞對Acl-LDL的吞噬作用，并加速細(xì)胞內(nèi)TC和CE的外流。 7.在三組患者中，藥物干預(yù)后的PPARα和ABCAl的表達(dá)在非諾貝特酸治療組較干預(yù)前明顯升高(P＜0.05)，阿托伐他汀鈣和普羅布考在干預(yù)前后對PPARα和ABCAl的表達(dá)沒有明顯影響。 8.在Ⅰ組，非諾貝特酸治療引起的細(xì)胞內(nèi)TC轉(zhuǎn)運

9、率明顯高于阿托伐他汀鈣和普羅布考的作用(P＜0.05)。在Ⅱ和Ⅲ組，三種藥物對TC外流的影響無差別。 結(jié)論：1.Ⅱ型糖尿病合并動脈粥樣硬化組的巨噬細(xì)胞內(nèi)大量脂質(zhì)沉積，其巨噬細(xì)胞對Acl-LDL有很強的吞噬能力。 2.Acl-LDL明顯抑制巨噬細(xì)胞PPARα和ABCA-1的表達(dá)，在Ⅱ型糖尿病合并動脈硬化組最明顯。 3.非諾貝特酸治療在三組患者均能夠明顯上調(diào)PPARα和ABCA-1的表達(dá)，在Ⅱ型糖尿病合并動脈硬化組非